HASMC细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：主动脉平滑肌细胞；HASMC
培养条件：平滑肌细胞培养基，scienCA-ll，货号：1101

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
气相纳米二氧化硅 99.8%,比表面积（BET）：170m2/g；粒径：7-40nAnti-MCP-3/CCL7/FITC  荧光素标记单核趋化蛋白3抗体(大、小鼠)IgG鸡蛋白酪氨酶受体N(PTPRN)酶联吸附测定试剂盒

气相纳米二氧化硅 99.8%,比表面积（BET）：120m2/g；粒径：7-40nAnti-MC-1R/FITC  荧光素标记黑素皮质素受体抗体IgG鸡p53上调凋亡调节因子(PUMA)酶联吸附测定试剂盒

疏水气相纳米二氧化硅 99.8%,比表面积(BET):230m2/g;;粒径:7-40nAnti-M-CSF/FITC  荧光素标记巨噬克隆激因子抗体IgG鸡桥粒斑蛋白(DSP)酶联吸附测定试剂盒

气相纳米二氧化硅 99.8%,比表面积（BET）：100m2/g；粒径：7-40nAnti-M-CSF Receptor/FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠巨噬集落激因子受体抗体IgG鸡功能相关抗原1(LFA-1)酶联吸附测定试剂盒

二氧化硅 99.5%,30±5nmAnti-Mcpt7/Tryptase Beta1/FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠肥大蛋白酶7抗体IgG鸡转化生长因子β激蛋白22(TSC22)酶联吸附测定试剂盒

二氧化硅 99.5%,15±5nmAnti-TPSB2/Tryptase Beta2/FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠肥大类胰蛋白酶β2IgG鸡内皮脂肪酶(EL/LIPG)酶联吸附测定试剂盒

气相纳米二氧化硅 99.8%,比表面积（BET）：380m2/g;粒径：7-40nmAnti-MCT1/FITC  荧光素标记单羧转运蛋白-1抗体IgG鸡α2抗纤溶酶(α2-AP)酶联吸附测定试剂盒

疏水性气相纳米二氧化硅 99.8%,比表面积（BET）：115m2/g；粒径Anti-MDM2/FITC  荧光素标记双微体2癌因抗体IgG鸡双糖链蛋白聚糖(BGN)酶联吸附测定试剂盒

气相纳米二氧化硅 99.8%,比表面积（BET）：150m2/g；粒径：7-40nAnti-Phospho-MDM2 (Ser166) /FITC  荧光素标记化双微体2癌因抗体IgG鸡信号传导转录激活因子6(STAT56)酶联吸附测定试剂盒

二氧化硅 99.9% metals basisAnti-Mdr-1/FITC  荧光素标记多药耐药蛋白抗体IgG鸡促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)酶联吸附测定试剂盒

碳化硅 99.9% metals basisAnti-Measles virus of fusion protein/FITC  荧光素标记抗麻疹病抗体IgG鸡T受体(TCR)酶联吸附测定试剂盒

碳化硅 99%,0.5～0.7umAnti-MEF2A/FITC  荧光素标记肌增强因子2抗体IgG鸡游离状腺原氨(fT3)酶联吸附测定试剂盒

碳化硅 ≥99.00Anti-Phospho-MEF2A (Thr312) /FITC  荧光素标记化肌增强因子2抗体IgG鸡质金属蛋白酶7(MMP-7)酶联吸附测定试剂盒

纳米碳化硅 99.9% metals basis,40nmAnti-Phospho-MEF2A (Ser408) /FITC  荧光素标记化肌增强因子2抗体IgG鸡降钙素原(PCT)酶联吸附测定试剂盒

二氧化锡 AR,99.5%Anti-Megsin/SER—PINB7 /FITC  荧光素标记丝氨(或半胱氨)蛋白酶抑制剂B7抗体IgG鸡质金属蛋白酶8(MMP-8)酶联吸附测定试剂盒
HASMC细胞异戊烯腺嘌呤核苷Elisa试剂盒(亲和纯化) 狗IgGGoat Anti-rat IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的羊抗大鼠IgG

异戊烯腺嘌呤7-糖苷Elisa试剂盒(亲和纯化) 狗IgMGoat Anti-rat IgG/PE-CY5  PE-CY5标记的羊抗大鼠IgG

脱氢抗坏血;氧化型抗坏血Elisa试剂盒(亲和纯化) 羊IgMGoat Anti-rat IgG/PE-Cy3  PE-Cy3标记的羊抗大鼠IgG

质膜氢-ATP酶Elisa试剂盒(亲和纯化) 豚鼠IgGGoat Anti-rat IgG/PE  PE标记的羊抗大鼠IgG

无机焦酶Elisa试剂盒(亲和纯化) 豚鼠IgMGoat Anti-rat IgG/HRP  辣根过氧化物酶标记的羊抗大鼠IgG

多不饱和脂肪Elisa试剂盒(亲和纯化) 马IgGGoat Anti-rat IgG/Gold  胶体金标记的羊抗大鼠IgG

异淀粉酶Elisa试剂盒(亲和纯化) 马IgMGoat Anti-rat IgG/FITC  FITC标记的羊抗大鼠IgG

ADP酶Elisa试剂盒(亲和纯化) 猴IgGGoat Anti-rat IgG/Cy7  Cy7标记的羊抗大鼠IgG

叶绿素b还原酶Elisa试剂盒(亲和纯化) 猪IgGGoat Anti-rat IgG/Cy5.5  Cy5.5标记的羊抗大鼠IgG
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。