JF-305细胞

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产品名称：胰腺癌细胞；JF-305
形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

培养条件：RPMI1640+10%FBS

传代方法：1：2传代
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

4,5-二氟-2- 98%Anti-p-Nrf2/FITC  荧光素标记化核因子2相关因子2抗体IgG鸡脂蛋白a(LP-a)酶联吸附测定试剂盒

3-氟-4-  98%Anti-Nrn1/Cpg15/FITC  荧光素标记转化神经突起蛋白抗体IgG鸡凋亡相关因子(FAS/CD95/TNFRSF6)酶联吸附测定试剂盒

3-氟-4- 98% Anti-CD303/BDCA-2/CLEC4C  荧光素标记C型凝集素结构域家族4成员C抗体IgG鸡抑瘤素M(OSM)酶联吸附测定试剂盒

4-氟-3- 98%Anti-CD304/BDCA-4/NRP-1 /FITC  荧光素标记神经纤毛蛋白-1抗体IgG鸡血浆抗凝蛋白S(PS)酶联吸附测定试剂盒  

4--3- 98%Anti-NRP-2/FITC  荧光素标记神经纤毛蛋白-2抗体IgG鸡苏氨酰tRNA合成酶(TARS)酶联吸附测定试剂盒  

2,4,6-三 98%Anti-NEDD4L/NEDD4-2/FITC  荧光素标记泛素连接酶NEDD4-2抗体IgG鸡转录激活因子-3(ATF-3)酶联吸附测定试剂盒

5-溴-5-硝-1,3-二恶烷 98%Anti-Phospho-NEDD4L (Ser342) /FITC  荧光素标记化泛素连接酶NEDD4-2抗体IgG鸡Bκ 轻肽因增强子核因子抑制因子ε(Nfkbie)酶联吸附测定试剂盒

溴乙酰溴 97%Anti-NRSF/REST/FITC  荧光素标记神经元抑制蛋白抗体IgG鸡补体因子8g(C8g)酶联吸附测定试剂盒  

桂油 FCCAnti-NSBP1/FITC  荧光素标记核小体结合蛋白1抗体IgG鸡血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/KDR)酶联吸附测定试剂盒

硫双二酚 97%Anti-NSE/FITC   荧光素标记神经元特异性烯化酶抗体IgG鸡血管**素样蛋白3(ANGPTL3)酶联吸附测定试剂盒

磺醋酰 分析标准品Anti-Ntn1/FITC  荧光素标记轴突导向因子1抗体IgG鸡球蛋白G Fc片段(Fcγ)酶联吸附测定试剂盒

磺醋酰 98%Anti-NT-3/FITC  荧光素标记神经营养因子-3抗体IgG鸡胸腺依赖性抗原(TD-Ag)酶联吸附测定试剂盒

3-巯酯  98%Anti-NT-4/NT-5 /FITC  荧光素标记神经生长因子4/5抗体IgG鸡绒毛膜促性腺α肽(CGα)酶联吸附测定试剂盒

邻 99%Anti-NTCP/FITC  荧光素标记钠离子/牛磺胆共转运蛋白IgG鸡角膜蛋白(KERA)酶联吸附测定试剂盒

3-乙酰氧-2-丁酮 98%Anti-NTN/FITC  荧光素标记神经生长因子抗体IgG鸡凋亡诱导因子(AIF)酶联吸附测定试剂盒
JF-305细胞金属硫蛋白Elisa试剂盒FITC标记重组金黄色葡萄球蛋白AGoat Anti-Guinea pig IgG/APC  APC标记的羊抗豚鼠IgG

辣椒环斑病Elisa试剂盒辣根过氧化物酶标记的重组蛋白GGoat Anti-Guinea pig IgG/AP  碱性酶（AP）标记的羊抗豚鼠IgG

莽草脱氢酶Elisa试剂盒金标记兔抗荧光素 (10nm/15nm)Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的羊抗豚鼠IgG

多酚氧化酶Elisa试剂盒Alexa Fluor 488标记兔IgG(流式同型对照)Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555标记的羊抗豚鼠IgG

蛋白(肽酰脯氨酰顺;反异构酶)NIMA结合1Elisa试剂盒荧光素PE-Cy5标记兔IgG(流式同型对照)Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488标记的羊抗豚鼠IgG

RACα丝氨;苏氨蛋白激酶Elisa试剂盒兔IgG(亲和层析纯���)Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的羊抗豚鼠IgG

胰岛素样生长因子1Elisa试剂盒荧光素PE-Cy3标记兔IgG(流式同型对照)Goat Anti-Guinea pig IgG  羊抗豚鼠IgG

神经肽YElisa试剂盒(亲和纯化) 兔IgMGoat anti-Gpig IgG whole serum  羊抗豚鼠IgG抗血清

骨碱性酶Elisa试剂盒荧光素PE标记兔IgG(流式同型对照)Goat Anti-Chicken IgG/RBITC  罗丹明标记的羊抗鸡IgG