PATU-8988/FU细胞

产品名称：胰腺癌氟尿嘧啶耐药株
形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

培养条件：RPMI-1640

传代方法：1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

碳化 99%,50nmAnti-P-p38 ERK/MAPK14 /FITC  荧光素标记化-丝裂原活化蛋白激酶p38抗体IgG绵羊γ干扰素(IFN-γ)酶联吸附测定试剂盒

纳米铋粉 99.9% metals basis,40nm,球形Anti-MAPKAP Kinase 2/FITC  荧光素标记丝裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗体IgG绵羊白介素2(IL-2)酶联吸附测定试剂盒

纳米铁粉 99.9%，50nmAnti-phospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠、兔、马、犬、猪、牛化丝裂原活化蛋白激酶p38抗体IgG绵羊白介素1β(IL-1β)酶联吸附测定试剂盒

纳米铁粉 99.9%，80nmAnti-Phospho-MAPKAPK2 (Thr222) /FITC  荧光素标记化丝裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗体IgG绵羊半胱氨蛋白酶抑制剂(CSTA)酶联吸附测定试剂盒

纳米碳化硅 99.9% metals basis,40nmAnti-Phospho-MAPKAPK2 (Thr334)/FITC  荧光素标记化丝裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗体IgG绵羊白介素12(IL-12)酶联吸附测定试剂盒

碳化钛 99%,40nmAnti-P27/kip1/Cy5  荧光素Cy5标记P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂IgG绵羊骨成型蛋白2 (BMP-2)酶联吸附测定试剂盒

化钛 99.9% metals basis,3-5μmAnti-MAP3K8/TPL2/FITC   荧光素标记丝裂原活化蛋白激酶激酶8抗体IgG绵羊白介素2受体(IL-2R)酶联吸附测定试剂盒

碳化锆 50nm, 99%Anti-KEAP1/FITC  荧光素标记胞质接头蛋白Keap1抗体IgG绵羊骨保护素(OPG)酶联吸附测定试剂盒

封口膜 parafilm

Anti-p300/KAT3B/FITC  荧光素标记转录接头蛋白EP300抗体IgG绵羊白介素6(IL-6)酶联吸附测定试剂盒

2--5-硝二酮  98%Anti-P53/FITC  荧光素标记肿瘤抑制因抗体（野生型P53）IgG绵羊白介素18(IL-18)酶联吸附测定试剂盒

次水杨铋  97%Anti-Mtp53/FITC  荧光素标记突变型P53抗体IgG绵羊趋化素样因子超家族成员5(CKLFSF5)酶联吸附测定试剂盒

(S)-(+)-1,2,3,4-四氢-1-萘  >99%, ee >98%Anti-P53(wt-p53)/FITC  荧光素标记肿瘤抑制因抗体（野生型P53）IgG绵羊硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)酶联吸附测定试剂盒

(R)-(-)-1,2,3,4-四氢-1-萘  >99%, ee >98%Anti-wtp53/FITC  荧光素标记野生型p53单克隆抗体IgG绵羊Apelin 13(AP13)酶联吸附测定试剂盒  

1, 2-二-3-代 97%Anti-p53BP1/53BP1/FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠p53结合蛋白1抗体IgG绵羊双肾上腺皮质(DCX)酶联吸附测定试剂盒

5-异噁唑-3-羧酯 98%Anti-p53BP1(Ser25/29) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化p53结合蛋白1抗体IgG绵羊高分子量角蛋白(CK-HMW)酶联吸附测定试剂盒
PATU-8988/FU细胞天冬氨蛋白酶Elisa试剂盒荧光素标记亲合素Goat Anti-Bovine IgG/HRP  辣根过氧化物酶标记的羊抗牛IgG

大豆花叶病Elisa试剂盒荧光素标记链霉亲和素Goat Anti-Bovine IgG/Gold  胶体金标记的羊抗牛IgG

紫云英矮缩病Elisa试剂盒罗丹明标记兔抗FITCGoat Anti-Bovine IgG/FITC  FITC标记的羊抗牛IgG

豆萎蔫病 Elisa试剂盒罗丹明标记羊抗人IgAGoat Anti-Bovine IgG/Cy7  Cy7标记的羊抗牛IgG

二酰辅酶AElisa试剂盒罗丹明标记亲合素Goat Anti-Bovine IgG/Cy5.5  Cy5.5标记的羊抗牛IgG

多聚ADP核糖聚合酶Elisa试剂盒罗丹明标记蛋白AGoat Anti-Bovine IgG/Cy5  Cy5标记的羊抗牛IgG

核糖体S6K蛋白激酶Elisa试剂盒罗丹明标记牛IgGGoat Anti-Bovine IgG/Cy3  Cy3标记的羊抗牛IgG

蔗糖非酵解型蛋白激酶1Elisa试剂盒罗丹明标记牛IgMGoat Anti-Bovine IgG/Bio  生物素标记的羊抗牛IgG

去乙酰化酶Sirtuin6Elisa试剂盒罗丹明标记鸡IgGGoat Anti-Bovine IgG/APC  APC标记的羊抗牛IgG