Panc05.04细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：胰腺癌细胞；Panc05.04
形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

培养条件：RPMI1640+10%FBS

传代方法：1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
 硫新斯的明 98%Anti-NGFR/FITC  荧光素标记神经生长因子受体抗体gG鸡着丝粒蛋白H(CENPH)酶联吸附测定试剂盒

正锆 70 wt. % 正溶液Anti-NGN3/FITC  荧光素标记神经元素3抗体IgG鸡性别决定区Y框蛋白18(SOX18)酶联吸附测定试剂盒

色 97%(GC)Anti-NGX6 /FITC  荧光素标记鼻咽癌相关因6抗体IgG鸡血管紧张素III(ANG III)酶联吸附测定试剂盒

2-溴-5-氧 98%Anti-NHE1/FITC  荧光素标记钠氢通道蛋白抗体IgG鸡正辅因子4(PC4)酶联吸附测定试剂盒

二氧化硅 99.99% metals basis,粒径:5μmAnti-NIK/FITC  荧光素标记NFkB诱导的激酶抗体IgG鸡突触素(SYP)酶联吸附测定试剂盒

二氧化硅 99.99% metals basis,粒径:10μmAnti-NIPP1/ARD1/FITC  荧光素标记核抑制蛋白酶1抗体IgG鸡巨噬活化因子(MAF)酶联吸附测定试剂盒

二氧化硅 99.99% metals basis,粒径:2μmAnti-NIS/FITC  荧光素标记钠转运体蛋白抗体IgG鸡碳酐酶XII(CA12)酶联吸附测定试剂盒

吸油棉 400*500*4mm*92G 外层无纺布料Anti-NIT2/FITC  荧光素标记抗NIT2蛋白抗体IgG鸡质金属蛋白酶12(MMP-12)酶联吸附测定试剂盒

任我游N560  5寸高清屏Anti-NKA/FITC  荧光素标记神经激肽A抗体IgG鸡转化生长因子β诱导蛋白(TGFβI)酶联吸附测定试剂盒

蚌型复合式活性碳口罩 CFB4SAnti-NK-1/Substance P Receptor /FITC  荧光素标记P物质受体抗体IgG鸡S100钙结合蛋白A11(S100A11)酶联吸附测定试剂盒

环沙星 98%Anti-NK-2R/FITC  荧光素标记神经激肽A受体/K物质受体抗体IgG鸡弹性蛋白微纤维界面蛋白1(EMILIN 1)酶联吸附测定试剂盒

马铃薯淀粉 BRAnti-NKB/FITC  荧光素标记神经激肽 B抗体IgG鸡丝氨蛋白酶12(PRSS12)酶联吸附测定试剂盒

蒽醌-2-磺钠盐 97%Anti-NKG2A/CD159a/KLRC1/FITC  荧光素标记NK受体2A/自然杀伤活化性受体2A抗体IgG鸡α-黑色素(αMSH)酶联吸附测定试剂盒

箱式电阻炉SX2-4-10Anti-NKG2C/FITC  荧光素标记NK受体2C/自然杀伤活化性受体2C抗体IgG鸡胱抑素C(Cys-C)酶联吸附测定试剂盒

马铃薯淀粉 BRAnti-NKG2D/CD314 /FITC  荧光素标记NK受体/自然杀伤活化性受体抗体IgG鸡核孔蛋白98kda(NUP98)酶联吸附测定试剂盒
Panc05.04细胞麦角固Elisa试剂盒荧光素Cy3标记大鼠IgMGoat Anti-human IgG/RBITC  罗丹明标记的羊抗人IgG

7-脱氢胆固Elisa试剂盒荧光素Cy3标记重组人白介素-1受体拮抗剂Goat Anti-human IgG/PE-Cy7  PE-Cy7标记的羊抗人IgG

乙激酶Elisa试剂盒荧光素Cy3标记血蓝蛋白Goat Anti-human IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的羊抗人IgG

C3H木质素合成酶Elisa试剂盒荧光素Cy3标记鸡卵白蛋白Goat Anti-human IgG/PE-CY5  PE-CY5标记的羊抗人IgG

ACC氧化酶Elisa试剂盒荧光素Cy3标记人血白蛋白Goat Anti-human IgG/PE-Cy3  PE-Cy3标记的羊抗人IgG

乙酰辅酶A羧化酶还原酶Elisa试剂盒荧光素Cy3标记胰糜蛋白酶Goat Anti-human IgG/PE  PE标记的羊抗人IgG

乙酰辅酶A羧化酶还原酶Elisa试剂盒Alexa Fluor 555标记羊IgG(流式同型对照)Goat Anti-human IgG/HRP  辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG

核苷二激酶Elisa试剂盒Alexa Fluor 555标记大鼠IgG(流式同型对照)Goat Anti-human IgG/Gold  胶体金标记的羊抗人IgG

谷蛋白Elisa试剂盒荧光素PE-Cy7标记兔IgG(流式同型对照)Goat Anti-human IgG/FITC  FITC标记的羊抗人IgG
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。