AN3CA细胞

形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

特征特性：AN3CA细胞建系于1964年。它衍生于内膜癌患者结转移组织，具有癌细胞的基本特性，能在体外长期传代培养，接种实验动物产生明显肿瘤。但细胞的生物学特性及超微结构尚未深入研究，仅发现该细胞系促黑合成为阴性。细胞常用于人内膜癌细胞生物学及其相关特性研究。

培养条件：DMEM/F12+15%FBS

传代方法：1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

六氟四丁 98%Anti-PERK/FITC  荧光素标记蛋白激酶R样内质网激酶抗体IgG绵羊纤维蛋白原γ(FGγ)酶联吸附测定试剂盒

3--1- 98%Anti-Phospho-PERK (Thr980)/FITC  荧光素标记化蛋白激酶样内质网激酶抗体IgG绵羊二氧化酶(DAO)酶联吸附测定试剂盒

二酯 99%Anti-peripherin/FITC  荧光素标记外周蛋白抗体IgG绵羊α肌动蛋白(α Actin)酶联吸附测定试剂盒

双乙钠 99%Anti-HSP-27/HRP  辣根过氧化物酶标记热休克蛋白27抗体IgG绵羊补体C3转化酶(C3c)酶联吸附测定试剂盒

溴化锂 99.9% metals basisAnti-P-fscn1/FITC  荧光素标记化纤维束蛋白同源物1/肌动蛋白集束蛋白/圆线虫紫癜 抗体IgG绵羊弹性蛋白酶2B(ELA2B)酶联吸附测定试剂盒  

塑料购物篮 520mm*330mm*260mmAnti-PG-C/FITC  荧光素标记胃蛋白酶原C抗体IgG绵羊载脂蛋白B(ApoB)酶联吸附测定试剂盒

DL-肉碱盐盐 98%Anti-PGC-1 Alpha/FITC  荧光素标记过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α抗体IgG绵羊补体因子8g(C8g)酶联吸附测定试剂盒  

全氟丁磺酰氟 96%Anti-PGE2/FITC  荧光素标记前列腺素E2抗体IgG绵羊纤维介素蛋白(FGL2)酶联吸附测定试剂盒  

噻虫啉  分析标准品Anti-PGRN /FITC  荧光素标记颗粒蛋白前体抗体IgG绵羊降钙素因相关肽(CGRP)酶联吸附测定试剂盒

噻虫啉Anti-PH-4/FITC  荧光素标记脯氨水解酶4抗体IgG绵羊胰腺再生蛋白3γ(REG3γ)酶联吸附测定试剂盒

6-氧-1-萘满酮 99%Anti-PHB/FITC  荧光素标记抑制素/肿瘤抑制因子抗体IgG绵羊胎盘催素(PL)酶联吸附测定试剂盒

Anti-PHD3 /FITC  荧光素标记脯氨羟化酶抗体IgG绵羊结蛋白(Des)酶联吸附测定试剂盒

Anti-phospho-FAK(pTyr577)/FITC  荧光素标记抗化粘着斑激酶抗体IgG绵羊低分子量角蛋白(CK-LMW)酶联吸附测定试剂盒

Anti-phospho-JNK1/2(pThr183/pTyr185)/FITC  荧光素标记抗化氨末端激酶1/2抗体IgG绵羊绒毛膜促性腺α肽(CGα)酶联吸附测定试剂盒

Anti-phospho GAP-43(pSer41)/FITC  荧光素标记抗化神经生长相关蛋白43抗体IgG绵羊抗原6复合物因座A(Ly6a)酶联吸附测定试剂盒
AN3CA细胞Ⅳ型胶原Elisa试剂盒豚鼠白介素4GLUT4  葡萄糖转运蛋白4抗体

Ⅶ型胶原Elisa试剂盒大鼠脑红蛋白GLUT3  葡萄糖转运蛋白3抗体

adropin蛋白Elisa试剂盒人原钙黏素1GLUT2  葡萄糖转运蛋白2抗体

ATP结合盒转运体A1Elisa试剂盒鲑鱼降钙素GLUT2  葡萄糖转运蛋白2

ATP结合盒转运体G1Elisa试剂盒兔白介素6GLUT12  葡萄糖转运蛋白12抗体

ATP酶Elisa试剂盒小鼠粘蛋白/粘液素5BGLUT10/Glucose Transporter GLUT10  葡萄糖转运蛋白10抗体

Bcl-2相关X蛋白Elisa试剂盒兔白介素10GLUT1  葡萄糖转运蛋白1抗体

B活化因子Elisa试剂盒大鼠血小板**素GLUR4  谷氨受体4抗体

B瘤-XLElisa试剂盒小鼠垂体腺苷环化酶激活肽GLUR3/GRIA 3  谷氨受体3抗体

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