实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
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产品名称
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规格
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货号
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HECS-CQ-EB细胞
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T25
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FS-X3498
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形态特性：上皮样
生长特性：贴壁生长
特征特性：该细胞是H.Kuramoto1968年分离的HECS-CQ-EA细胞亚株。不同於HECS-A-1的是：该亚株在培养第135天到190天之间表现出稳定的生长周期，且重现扁平，与亲本���胞系相比更具铺路石式样。此外主要染色体组是亲本细胞的两倍。
培养条件：DMEM(高糖）+10%FBS
传代方法：1:3传代，2-3天换液一次
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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
Anti-Phospho-PKA C (Thr197)/FITC 荧光素标记化蛋白激酶C亚性抗体IgG绵羊CCAAT增强子结合蛋白γ(C/EBPγ)酶联吸附测定试剂盒
Anti-phospho-PKC delta (Thr505)/FITC 荧光素标记化蛋白激酶C亚性D型抗体IgG绵羊二肽肽酶IV (DPP4)酶联吸附测定试剂盒
Anti-phospho-PKC delta (Tyr52)/FITC 荧光素标记化蛋白激酶C亚性D型抗体IgG绵羊Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)酶联吸附测定试剂盒
Anti-phospho-PKC delta (Tyr311)/FITC 荧光素标记化蛋白激酶C亚性D型抗体IgG绵羊状腺球蛋白(TG)酶联吸附测定试剂盒
Anti-Phospho-PKC gamma (Thr514)/FITC 荧光素标记化蛋白激酶C亚型G抗体IgG绵羊Rho GDP解离抑制因子α(ARHGDIα)酶联吸附测定试剂盒
Anti-Phospho-PKC gamma (Thr674) /FITC 荧光素标记化蛋白激酶C亚型G抗体IgG绵羊胃蛋白酶原C(PGC)酶联吸附测定试剂盒
Anti-PKB/FITC 荧光素标记蛋白激酶B抗体IgG绵羊质衍生因子4(SDF-4)酶联吸附测定试剂盒
Anti-PKB/AKT-1 /FITC 荧光素标记蛋白激酶B抗体IgG绵羊转铁蛋白受体2(TFR2)酶联吸附测定试剂盒
Anti-P-AKT1/PKB1/2/3(pSer473) /FITC 荧光素标记化蛋白激酶B(pSer473)抗体IgG绵羊葡萄糖-6-脱氢酶(G6PD)酶联吸附测定试剂盒
Anti-phospho-Akt(Thr450) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠化蛋白激酶B抗体（苏氨化位点：450）IgG绵羊激肽释放酶7(KLK7)酶联吸附测定试剂盒
Anti-PRAS40/AKT1 substrate 1/FITC 荧光素标记蛋白激酶AKT底物1抗体IgG绵羊凝血酶受体(TR)酶联吸附测定试剂盒
Anti-Phospho-PRAS40 (Thr246)/FITC 荧光素标记化蛋白激酶AKT底物1抗体IgG绵羊Ras-GTP酶激活蛋白1(Ras-GAP1)酶联吸附测定试剂盒
Anti-PKC beta1/2/FITC 荧光素标记蛋白激酶C beta抗体IgG绵羊趋化素样因子超家族成员7(CKLFSF7)酶联吸附测定试剂盒
Anti-PKC alpha/FITC 荧光素标记蛋白激酶C α抗体IgG绵羊B因子(BF)酶联吸附测定试剂盒
Anti-Phospho-PKC alpha/beta II (Thr638/641)/FITC 荧光素标记化蛋白激酶C α/β2抗体IgG绵羊核糖体蛋白S6激酶β1(RPS6Kβ1)酶联吸附测定试剂盒
HECS-CQ-EB细胞E选择素Elisa试剂盒大鼠丝氨/苏氨蛋白酶GLB1L3 β半糖苷酶1样蛋白3抗体
FMS样酪氨激酶3配体Elisa试剂盒鱼促黄体GKRP 葡萄糖激酶调节蛋白抗体
GATA结合蛋白3Elisa试剂盒小鼠Ⅰ型胶原交联羧末端肽GK5/Glycerokinase 5 甘油激酶5抗体
G蛋白偶联受体120Elisa试剂盒人球蛋白A Fc段受体ⅠGJC2/Connexin 47 间隙连接蛋白47抗体
G蛋白偶联受体40Elisa试剂盒兔子5羟色GIT1 G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1
IgA-纤维连接蛋白Elisa试剂盒兔子β内肽GIRK3/KCNJ9 G蛋白激活内向通道3抗体
III型前胶原Elisa试剂盒小鼠神经丝蛋白GIRK2/Kir3.2 G蛋白激活内流通道蛋白2抗体
IV型胶原酶Elisa试剂盒鱼化腺苷活化蛋白激酶GIRK1 G蛋白激活内向通道1抗体
I型胶原Elisa试剂盒人球蛋白E Fc段受体ⅡGIPC-2 胞浆区相关蛋白GIPC2抗体
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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