CS-33A细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

形态特性：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

特征特性：CS-33A细胞株是N.Auersperg从宫颈癌切片中建立的一系列细胞株(参见ATCCCRL-1594和ATCCCRL-1595)中的一株。细胞一开始就表现出亚二倍体核型及上皮细胞形态。连续传代可以观察到核型不稳定。存在成视网膜细胞瘤蛋白(pRB)，但大小不正常。P53表达上调，且有一个273位密码子的点突变导致Arg->Cys的替换。人**瘤病毒DNA及RNA阴性。

培养条件：MEM培养基(GIBCO,添加NaHCO31.5g/L，SodiumPyruvate0.11g/L)，90%；胎牛血清，10%。气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。

传代方法：1:2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
Anti-PTPRJ/CD148/DEP1/FITC  荧光素标记CD148抗体IgG绵羊原纤维蛋白2(FBN2)酶联吸附测定试剂盒

Anti-CD150/SLAM/FITC  荧光素标记CD150抗体IgG绵羊胞浆型脂酶A2(cPLA2)酶联吸附测定试剂盒

Rabbit Anti-human sIgA/FITC  荧光素标记兔抗人型IgA抗体绵羊半糖6硫酯酶(Gal-6S)酶联吸附测定试剂盒  

Anti-Rabbit Anti--mouse IgA/HRP  辣根过氧化物酶标记兔抗小鼠IgA抗体绵羊血管活性肠肽(VIP)酶联吸附测定试剂盒

Anti-PTTG/FITC  荧光素标记垂体肿瘤转化因抗体IgG绵羊脂酶A2受体1(PLA2R1)酶联吸附测定试剂盒

Anti-Raptor /FITC  荧光素标记mTOR相关调控蛋白抗体IgG绵羊球蛋白G1(IgG1)酶联吸附测定试剂盒

Anti-Rad17/FITC  荧光素标记周期检控Rad17蛋白抗体IgG绵羊色素P450家族成员1A2(CYP1A2)酶联吸附测定试剂盒

Anti-Phospho-Rad17 (Ser645) /FITC  荧光素标记化周期检控Rad17蛋白抗体IgG绵羊载脂蛋白C1(ApoC1)酶联吸附测定试剂盒

Anti-Rad51/FITC  荧光素标记Rad51抗体IgG绵羊蛋白17(Sp17)酶联吸附测定试剂盒

Anti-Rad52/FITC  荧光素标记Rad52抗体IgG绵羊γ谷氨酰半胱氨合成酶(γ-ECS)酶联吸附测定试剂盒

Anti-RAD51C/FITC  荧光素标记癌和卵巢癌易感因RAD51C抗体IgG绵羊生存素(Surv)酶联吸附测定试剂盒

Anti-RAM-11/FITC  荧光素标记抗RAM-11抗体IgG绵羊NOD样受体(NLR)酶联吸附测定试剂盒

Anti-RAMP-1/FITC  荧光素标记受体活性调制蛋白1抗体IgG绵羊唾液(SA)酶联吸附测定试剂盒

anti-RAP1A/FITC  荧光素标记抗Rap1抗体IgG绵羊蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M2(M-AChRM2)酶联吸附测定试剂盒

Anti-RAR- Alpha /FITC  荧光素标记维受体-α 抗体IgG绵羊神经营养因子4(NT-4)酶联吸附测定试剂盒
CS-33A细胞α黑色素Elisa试剂盒巨病 IgG(间接法二步法)GDNF Receptor alpha 2  胶质系源性神经营养因子受体α2抗体

α平滑肌肌动蛋白Elisa试剂盒巨病 IgM(间接法二步法)GDNF  胶质源性神经营养因子抗体

α葡萄糖苷酶Elisa试剂盒巨病 IgM(捕获法一步法)GDN/SERPINE2  胶质源性连接蛋白抗体

α酮戊二脱氢酶Elisa试剂盒巨病 IgM(捕获法二步法)GDIA2/ARHGDIB  肿瘤转移抑制因GDIA2抗体

α酮戊二脱氢酶复合体Elisa试剂盒风疹胞病 IgG(间接法二步法)GDIA1  肿瘤转移抑制因GDIA1抗体

β1肾上腺素受体抗体Elisa试剂盒风疹胞病 IgM(间接法二步法)GDF9  生长分化因子9抗体

β2肾上腺素受体抗体Elisa试剂盒风疹病 IgM(捕获法一步法)GDF9  生长分化因子9抗体

β2微球蛋白Elisa试剂盒人球蛋白G Fc段受体ⅠGDF8/MSTN  生长分化因子8抗体

β氨己糖苷酶Elisa试剂盒鲑鱼补体蛋白3GDF8  生长分化因子8/肌肉抑制素抗体
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

���法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。