U14细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：小鼠宫颈癌细胞；U14
生长特性：半贴壁生长

特征特性：将U14瘤株腹腔接种于615小鼠,利用腹水进行原代培养，建立细胞系。615小鼠、C57BL/6小鼠移植成瘤率均为100%。

培养条件：RPMI1640+10%FBS

传代方法：1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用��请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
11-β-羟基类固醇脱氢酶2(HSD11β2)elisa检测试剂盒英文名称：HSD11β2 ELISA Kit，英文缩写：HSD11β2，产品别名：11-β-羟基类固醇脱氢酶2(HSD11β2)ELISA检测试剂盒，11-β-羟基类固醇脱氢酶2(HSD11β2)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2(TRAIL-R2/DR5)elisa检测试剂盒英文名称：TRAIL-R2/DR5 ELISA Kit，英文缩写：TRAIL-R2/DR5，产品别名：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2(TRAIL-R2/DR5)ELISA检测试剂盒，肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2(TRAIL-R2/DR5)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

自然抗性相关巨噬细胞蛋白1(NRAMP-1)elisa检测试剂盒英文名称：NRAMP-1 ELISA Kit，英文缩写：NRAMP-1，产品别名：自然抗性相关巨噬细胞蛋白1(NRAMP-1)ELISA检测试剂盒，自然抗性相关巨噬细胞蛋白1(NRAMP-1)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

脂肪酸结合蛋白4(FABP-4)elisa检测试剂盒英文名称：FABP-4 ELISA Kit，英文缩写：FABP-4，产品别名：脂肪酸结合蛋白4(FABP-4)ELISA检测试剂盒，脂肪酸结合蛋白4(FABP-4)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

载脂蛋白E(Apo-E)elisa检测试剂盒英文名称：Apo-E ELISA Kit，英文缩写：Apo-E，产品别名：载脂蛋白E(Apo-E)ELISA检测试剂盒，载脂蛋白E(Apo-E)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

音猬因子N端(Shh-N)elisa检测试剂盒英文名称：Shh-N ELISA Kit，英文缩写：Shh-N，产品别名：音猬因子N端(Shh-N)ELISA检测试剂盒，音猬因子N端(Shh-N)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

胰高血糖素样肽2(GLP2)elisa检测试剂盒英文名称：GLP2 ELISA Kit，英文缩写：GLP2，产品别名：胰高血糖素样肽2(GLP2)ELISA检测试剂盒，胰高血糖素样肽2(GLP2)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

叶酸受体(FOLR)elisa检测试剂盒英文名称：FOLR ELISA Kit，英文缩写：FOLR，产品别名：叶酸受体(FOLR)ELISA检测试剂盒，叶酸受体(FOLR)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

血栓调节蛋白(TM)elisa检测试剂盒英文名称：TM ELISA Kit，英文缩写：TM，产品别名：血栓调节蛋白(TM)ELISA检测试剂盒，血栓调节蛋白(TM)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

血管**素2(ANG-2)elisa检测试剂盒英文名称：ANG-2 ELISA Kit，英文缩写：ANG-2，产品别名：血管**素2(ANG-2)ELISA检测试剂盒，血管**素2(ANG-2)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

雄结合蛋白(ABP)elisa检测试剂盒英文名称：ABP ELISA Kit，英文缩写：ABP，产品别名：雄结合蛋白(ABP)ELISA检测试剂盒，雄结合蛋白(ABP)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
U14细胞TPD52/Prostate and colon associated protein  前列腺癌和结肠癌相关蛋白规格 0.2ml

TPA/PLAT  组织型纤溶酶原激活剂抗体规格 0.1ml

TP53TG5  p53靶蛋白5抗体规格 0.2ml

TP53TG3  p53靶蛋白3抗体规格 0.2ml

TP53I8/EI24  肿瘤蛋白p53诱导蛋白8规格 0.1ml

TP53I13  肿瘤蛋白p53诱导蛋白13(肿瘤抑制基因)规格 0.2ml

TP53I11  肿瘤蛋白P53诱导蛋白11抗体规格 0.2ml
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。