实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
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产品名称
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规格
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货号
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RBL-2H3细胞
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T25
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FS-X3760
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产品名称：大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞
形态特性：成纤维细胞
生长特性：贴壁生长
RBL-2H3是1978年国立牙科研究所的学实验室从Wistar大鼠保持肿瘤状态的嗜碱性细胞中分离和克隆出来的嗜碱性白血病细胞株。这些细胞具有高亲和力的IgE受体。通过集聚这些受体或与钙离子载体协同作用可以激活它们分泌组胺及其他递质。这株细胞广泛地用于研究肥大细胞FCA-RI和分泌的生化途径。RBL-2H3细胞是研究FCA-RI结构的模型。它们广泛地用于研究细胞分泌的不同方面，包括细胞内钙浓度改变、磷酸脂酶激活、蛋白激酶和小G蛋白的作用。虽然几乎所有批号的FBS都支持细胞的生长，但在某些批号中
培养条件：Eagle'sMinimumEssentialMedium+15%FBS
消化CQ-5分钟。1:2。3天内可长满。
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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
磷酯酶Cγ链(PLCγ1)elisa检测试剂盒英文名称：PLCγ1 ELISA Kit，英文缩写：PLCγ1，产品别名：磷酯酶Cγ链(PLCγ1)ELISA检测试剂盒，磷酯酶Cγ链(PLCγ1)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)elisa检测试剂盒英文名称：sPECAM-1/sCD31 ELISA Kit，英文缩写：sPECAM-1/sCD31，产品别名：可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA检测试剂盒，可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
粒细胞特异性抗核抗体(GS-ANA)elisa检测试剂盒英文名称：GS-ANA ELISA Kit，英文缩写：GS-ANA，产品别名：粒细胞特异性抗核抗体(GS-ANA)ELISA检测试剂盒，粒细胞特异性抗核抗体(GS-ANA)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
颗粒酶B(Gzms-B)elisa检测试剂盒英文名称：Gzms-B ELISA Kit，英文缩写：Gzms-B，产品别名：颗粒酶B(Gzms-B)ELISA检测试剂盒，颗粒酶B(Gzms-B)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
人抗糖蛋白抗体(GP)elisa检测试剂盒英文名称：GP ELISA Kit，英文缩写：GP，产品别名：人抗糖蛋白抗体(GP)ELISA检测试剂盒，人抗糖蛋白抗体(GP)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
人抗可溶性肝抗原抗体(SLA)elisa检测试剂盒英文名称：SLA ELISA Kit，英文缩写：SLA，产品别名：人抗可溶性肝抗原抗体(SLA)ELISA检测试剂盒，人抗可溶性肝抗原抗体(SLA)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
人抗单核细胞抗体(AMA)elisa检测试剂盒英文名称：AMA ELISA Kit，英文缩写：AMA，产品别名：人抗单核细胞抗体(AMA)ELISA检测试剂盒，人抗单核细胞抗体(AMA)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
精子相关抗原7(SPAG7)elisa检测试剂盒英文名称：SPAG7 ELISA Kit，英文缩写：SPAG7，产品别名：精子相关抗原7(SPAG7)ELISA检测试剂盒，精子相关抗原7(SPAG7)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
胶原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)elisa检测试剂盒英文名称：HCBⅡ ELISA Kit，英文缩写：HCBⅡ，产品别名：胶原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA检测试剂盒，胶原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
极低密度脂蛋白(VLDL)elisa检测试剂盒英文名称：VLDL ELISA Kit，英文缩写：VLDL，产品别名：极低密度脂蛋白(VLDL)ELISA检测试剂盒，极低密度脂蛋白(VLDL)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
基质γ羧基谷氨酸蛋白(MGP)elisa检测试剂盒英文名称：MGP ELISA Kit，英文缩写：MGP，产品别名：基质γ羧基谷氨酸蛋白(MGP)ELISA检测试剂盒，基质γ羧基谷氨酸蛋白(MGP)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
RBL-2H3细胞Rabbit Anti-human sIgA/PE-Cy7 PE-Cy7标记的兔抗人分泌型IgA规格 0.1ml
Rabbit Anti-human sIgA/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗人分泌型IgA规格 0.1ml
Rabbit Anti-human sIgA/PE-CY5 PE-CY5标记的兔抗人分泌型IgA规格 0.1ml
Rabbit Anti-human sIgA/PE-Cy3 PE-Cy3标记的兔抗人分泌型IgA规格 0.1ml
Rabbit Anti-human sIgA/PE PE标记的兔抗人分泌型IgA规格 0.1ml
Rabbit Anti-human sIgA/HRP 辣根过氧化物酶标记兔抗人IgA规格 0.1ml
Rabbit Anti-human sIgA/Gold 胶体金标记的兔抗人分泌型IgA规格 0.5ml
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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