NCI-H1770细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：非小细胞肺癌细胞
生长特性：悬浮生长

培养条件：ACL-4medium(serum-free)

ThebasemediumforthisCA-lllineisATCCformulatedDMEM:F12MediumCatalogNo.30-2006.Tomakethecompletegrowthmedium,addthefollowingcomponentstothebasemedium:

0.02mg/mlinsulin

0.01mg/mltransferrin

25nMsodiumselenite(finalconc.)

50nMHydrocortisone(finalconc.)

1ng/mlEpidermalGrowthFactor(donotfilter)

0.01mMethanolamine(finalconc.)

0.01mMphosphorylethanolamine(finalconc.)

100pMtriiodothyronine(finalconc.)

0.5%(w/v)bovineserumalbumin(finalconc.)

0.5mMsodiumpyruvate(finalconc.)

extra2mML-glutamine(forfinalconc.of4.5mM

传代方法：随细胞的生长而换液

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
白细胞抗原DR(HLA-DR)elisa检测试剂盒英文名称：HLA-DR ELISA Kit，英文缩写：HLA-DR，产品别名：白细胞抗原DR(HLA-DR)ELISA检测试剂盒，白细胞抗原DR(HLA-DR)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)elisa检测试剂盒英文名称：AGPs ELISA Kit，英文缩写：AGPs，产品别名：阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)ELISA检测试剂盒，阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

白介素21(IL-21)elisa检测试剂盒英文名称：IL-21 ELISA Kit，英文缩写：IL-21，产品别名：白介素21(IL-21)ELISA检测试剂盒，白介素21(IL-21)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

β-防御素3(β-BD-3)elisa检测试剂盒英文名称：β-BD-3 ELISA Kit，英文缩写：β-BD-3，产品别名：β-防御素3(β-BD-3)ELISA检测试剂盒，β-防御素3(β-BD-3)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

α辅肌动蛋白3(ACTN-3)elisa检测试剂盒英文名称：ACTN-3 ELISA Kit，英文缩写：ACTN-3，产品别名：α辅肌动蛋白3(ACTN-3)ELISA检测试剂盒，α辅肌动蛋白3(ACTN-3)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

toll样受体2(TLR2)elisa检测试剂盒英文名称：TLR2 ELISA Kit，英文缩写：TLR2，产品别名：toll样受体2(TLR2)ELISA检测试剂盒，toll样受体2(TLR2)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)elisa检测试剂盒英文名称：P-gp ELISA Kit，英文缩写：P-gp，产品别名：P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)ELISA检测试剂盒，P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

G蛋白偶联受体109A(GPR109A)elisa检测试剂盒英文名称：GPR109A ELISA Kit，英文缩写：GPR109A，产品别名：G蛋白偶联受体109A(GPR109A)ELISA检测试剂盒，G蛋白偶联受体109A(GPR109A)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

c-myc癌基因产物(c-myc)elisa检测试剂盒英文名称：c-myc ELISA Kit，英文缩写：c-myc，产品别名：c-myc癌基因产物(c-myc)ELISA检测试剂盒，c-myc癌基因产物(c-myc)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

B细胞生长因子(BCGF)elisa检测试剂盒英文名称：BCGF ELISA Kit，英文缩写：BCGF，产品别名：B细胞生长因子(BCGF)ELISA检测试剂盒，B细胞生长因子(BCGF)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

Ⅱ型前胶原N端前肽(PⅡNP)elisa检测试剂盒英文名称：PⅡNP ELISA Kit，英文缩写：PⅡNP，产品别名：Ⅱ型前胶原N端前肽(PⅡNP)ELISA检测试剂盒，Ⅱ型前胶原N端前肽(PⅡNP)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
NCI-H1770细胞PTPN7/HePTP  非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶7抗体规格 0.2ml

PTPN6/SHP1  蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗体规格 0.1ml

PTPN4/MEG1  蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型4抗体规格 0.1ml

PTPN11  蛋白酪氨酸磷酸酶2抗体规格 0.1ml

PTPIP51/FAM82A2  蛋白酪氨酸磷酸酶相互作用蛋白51抗体规格 0.2ml

PTPH1/PTPN3  蛋白酪氨酸磷酸酶H1抗体规格 0.2ml

PTP1B  蛋白酪氨酸磷酸酶-1B规格 0.1ml
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。