LWnt3A细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：小鼠皮下结缔组织细胞
形态特性：成纤维细胞

生长特性：贴壁生长

特征特性：L-M(TK-)CA-lls(ATCCCCL-1.3)用Wnt-3A表达载体转染并在含G418的培养基中筛选稳转株。Wnt-3A基因编码一个有变异的信号功效分泌性糖蛋白。Wnt基因控制胚胎发过程中的许多模式形成和生长事件。这些细胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。它们是目前**Wnt-3A条件培养基的好来源。由于这种条件培养基还包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，对于涉及Wnt-3A条件培养基的实验有必要用其来源细胞株(ATCCCRL-2648)作对照。

培养条件：DMEM（高糖）+10%FBS

传代方法： 1:4~1:10传代；2~3天换液1次。

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
高尔基体蛋白A4(GOLGA4)elisa检测试剂盒英文名称：GOLGA4 ELISA Kit，英文缩写：GOLGA4，产品别名：高尔基体蛋白A4(GOLGA4)ELISA检测试剂盒，高尔基体蛋白A4(GOLGA4)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

盖膜蛋白β(TECTβ)elisa检测试剂盒英文名称：TECTβ ELISA Kit，英文缩写：TECTβ，产品别名：盖膜蛋白β(TECTβ)ELISA检测试剂盒，盖膜蛋白β(TECTβ)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

肝肾骨碱性磷酸酶(ALPL)elisa检测试剂盒英文名称：ALPL ELISA Kit，英文缩写：ALPL，产品别名：肝肾骨碱性磷酸酶(ALPL)ELISA检测试剂盒，肝肾骨碱性磷酸酶(ALPL)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

钙蛋白酶12(CAPN12)elisa检测试剂盒英文名称：CAPN12 ELISA Kit，英文缩写：CAPN12，产品别名：钙蛋白酶12(CAPN12)ELISA检测试剂盒，钙蛋白酶12(CAPN12)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)elisa检测试剂盒英文名称：SCG2 ELISA Kit，英文缩写：SCG2，产品别名：分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)ELISA检测试剂盒，分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

防御素β132(DEFβ132)elisa检测试剂盒英文名称：DEFβ132 ELISA Kit，英文缩写：DEFβ132，产品别名：防御素β132(DEFβ132)ELISA检测试剂盒，防御素β132(DEFβ132)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

泛素特异性肽酶8(USP8)elisa检测试剂盒英文名称：USP8 ELISA Kit，英文缩写：USP8，产品别名：泛素特异性肽酶8(USP8)ELISA检测试剂盒，泛素特异性肽酶8(USP8)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

二氢硫辛酸转乙酰基酶(DLAT)elisa检测试剂盒英文名称：DLAT ELISA Kit，英文缩写：DLAT，产品别名：二氢硫辛酸转乙酰基酶(DLAT)ELISA检测试剂盒，二氢硫辛酸转乙酰基酶(DLAT)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

多配体蛋白聚糖3(SDC3)elisa检测试剂盒英文名称：SDC3 ELISA Kit，英文缩写：SDC3，产品别名：多配体蛋白聚糖3(SDC3)ELISA检测试剂盒，多配体蛋白聚糖3(SDC3)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

动力蛋白激活蛋白1(DCTN1)elisa检测试剂盒英文名称：DCTN1 ELISA Kit，英文缩写：DCTN1，产品别名：动力蛋白激活蛋白1(DCTN1)ELISA检测试剂盒，动力蛋白激活蛋白1(DCTN1)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。

蛋白聚糖3(PRG3)elisa检测试剂盒英文名称：PRG3 ELISA Kit，英文缩写：PRG3，产品别名：蛋白聚糖3(PRG3)ELISA检测试剂盒，蛋白聚糖3(PRG3)检测试剂盒产品保存：2~8℃、有效期6个月。
LWnt3A细胞PCDH11Y  原钙粘附蛋白11Y抗体规格 0.2ml

PCDH11X  原钙粘附蛋白11X抗体规格 0.2ml

PCDH1  原钙粘附蛋白1抗体规格 0.2ml

PCB  丙酮酸羧化酶抗体规格 0.2ml

PCANAP2/Prostein  前列腺癌相关蛋白2抗体规格 0.2ml

P-cadherin  P-钙粘附分子抗体规格 0.1ml

PBR/DBI/TSPO  外周苯二氮受体抗体规格 0.1ml
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。