TRzol（总 RNA 提取试剂）上海抚生实业有限公司

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产品名称：TRzol（总 RNA 提取试剂）
产品型号：A-Hc2001
产品展商：抚生
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简单介绍

TRzol（总 RNA 提取试剂）公司正在出售的产品：酵母高纯质粒小量快速提取试剂盒高纯度质粒大量快速提取试剂盒博德特氏菌基因组亚型流感病毒核酸检测试剂盒无内高纯质粒大量提取试剂盒

产品描述

商品属性：

货号	规格	产品名称
A-Hc2001-50ml	50ml	TRzol（总 RNA 提取试剂）( 红 )
A-Hc2001-50ml×2	50ml×2	TRzol（总 RNA 提取试剂）( 红 )
A-Hc2001-50ml	50ml	TRzol（总 RNA 提取试剂）( 无色 )
A-Hc2001-50ml×2	50ml×2	TRzol（总 RNA 提取试剂）( 无色 )

储存条件：

TRzol（总 RNA 提取试剂）TRzol 在室温下能稳定保存 12 个月。尽管如此，为达到佳效果，我们建议保存在 2-8℃的环境下。
重要提示：
有毒物接触皮肤或者不慎吞服，会导致灼伤。一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。若感不适，看医生并寻求苯酚和其他成分的正确方案。
产品介绍：

TRzol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和裂解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层、中间层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来回收。无论是人、动物、植物还是，该方法对少量及大量的组织和细胞均有较好的分离效果。TRzol 试剂操作上的简单性允许同时处理多个样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRzol 抽提的总 RNA 能够避免 DNA 和蛋白的污染，可用于 RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+筛选、体外翻译、RNA 酶保护分析和分子克隆。如果是用于 PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的 DNase I 来处理抽提的总 RNA。
TRzol试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA经琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7kb和15kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体的分子量约在5 kb (28S)和2

kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。

注意事项：

1.从少量的组织(1~10mg)或细胞(102-104 个)中分离 RNA 样品：往组织或细胞中加入 800µl TRzol。待样品裂解后，加入氯仿并进行步骤 2 中的抽提操作。在用异丙醇沉淀 RNA 之前，加入 5~10μg 无 RNA 酶的 glycogen 作为水样层的载体。为降低其黏度在加入氯仿前用 26 号注射器抽吸两次以切断基因组 DNA。Glycogen 会留在水样层中并和 RNA 共析出。在浓缩到4mg/ml 之前它不会抑制逆转录反应链的合成也不会抑制 PCR。
2.在匀浆化后和加入氯仿之前，样品可以在-60℃或者-70℃保存至少一个月。将RNA 沉淀溶于 75%的乙醇在 2-8℃至少可以保存一周，在-5—-20℃下至少可保存一年。
3.用 TRzol 抽提 RNA 时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无例外，室温保持在 15~30℃的条件下。
自备试剂：
氯仿、异丙醇、75%乙醇(RNase-Free water 配制)、RNase-Free water（将水加入无RNA 酶的玻璃瓶中，加入 DEPC 至 0.1% (V/V)。放置过夜并高压。0.5% SDS溶液(RNase-Free water 配制)（可选）。
操作步骤：

1.样品预处理
a. 植物组织：以叶片 RNA 提取为例。取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在 TRzol 试剂中研磨，研磨要迅速，好不要超过 1min。大约 100mg 叶片使用 1ml TRzol 试剂。
b. 动物组织：以鼠肝脏 RNA 提取为例。取新鲜或-70℃冻存组织，每 30-50mg 组织加入 1ml TRzol 试剂，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积一般不要超过 TRzol 试剂体积的 10%。
c.单层生长的细胞：直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的TRzol裂解细胞，通过移液管分次移出细胞裂解物。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRzol量（每10cm2加1ml）。当TRzol量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。
d.悬浮生长的细胞：通过离心来沉淀细胞。在TRzol试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~10×10
6的动物细胞，植物或酵母菌细胞或每1×10
加1ml的TRzol。在加入TRzol前应避免洗涤细胞，因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和可能需要使用匀浆器。
2.分离阶段将匀浆样品在15 -30°C条件下孵育5 min以使核蛋白体完全分解。（可选步骤：4℃ 12,000rpm(~13,400×g) 离心10min，取上清。注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。）每1ml TRzol加0.2ml氯仿。盖紧样品管盖，用手用力摇晃试管15秒并将其在室温下孵育2-3 min。4℃ 12,000rpm(~13,400×g)离心15 min。离心后混合物分成三层：下层苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA存在于上层水样层当中。水样层的容量大约为所加TRzol容量的60%。
3.RNA 的沉淀将水样层转移到新的离心管中，如果希望分离DNA和蛋白，有机层和中间层同样要予以保留。通过将水样层和异丙醇混合来沉淀RNA。每1ml TRzol加入0.5ml异丙醇，混匀。将混合的样品在15 -30°C条件下孵育10min，4℃ 12,000rpm(~13,400×g)离心15 min。RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。
4.RNA 的漂洗
移去上层悬液。用75%的乙醇(RNase-Free water配制)洗涤RNA沉淀1-2次，每1ml 的TRzol至少加1ml的75%乙醇。旋涡振荡混合样品并在2~8°℃下以不超过7,500×g的离心力高速冷冻离心5 min。

5.RNA 的再溶解室温简单干燥RNA沉淀，不要在真空管里离心干燥RNA。尤为重要的是，不能让 RNA沉淀完全干燥那样会极大地降低它的可溶性。部分溶解的RNA样品其OD260/OD280 比值<1.6。用移液管分几次移取RNase-Free water或0.5%SDS溶(RNase-Free water配制) 来溶解RNA（如果RNA以后要用于酶切反应时，避免使用SDS。）RNA还能被100%甲酰胺（除去离子）再溶解并保存在-70°C。

公司正在出售的产品：

高纯质粒小提中量快速提取试剂盒	流感嗜血杆菌基因组DNA
琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒	铜绿假单胞菌基因组DNA
琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒	阴沟肠杆菌基因组DNA
PCR产物纯化回收试剂盒	产气克雷伯氏菌基因组DNA
PCR产物纯化回收试剂盒	黏质沙雷氏菌基因组DNA
多功能DNA纯化回收试剂盒	甲型副伤寒沙门氏菌基因组DNA
多功能DNA纯化回收试剂盒	肺炎克雷伯氏菌基因组DNA
通用DNA纯化回收试剂盒	普通变形杆菌基因组DNA
全血基因组 DNA 快速提取试剂盒	嗜酸乳杆菌基因组DNA
全血基因组 DNA 快速提取试剂盒	金黄色葡萄球菌基因组DNA
血液基因组 DNA 提取系统（0.1-10ml盐析法）	黑曲霉基因组DNA
血液基因组 DNA 提取系统（0.1-11ml盐析法）	烟曲霉基因组DNA
0.1-1ml 凝固血基因组 DNA 提取试剂盒	嗜肺军团菌亚种基因组DNA
组织 / 细胞基因组 DNA 快速提取试剂盒	大豆根瘤菌基因组DNA
组织 / 细胞基因组 DNA 快速提取试剂盒	TRzol（总 RNA 提取试剂）白假丝酵母基因组DNA
全血 / 组织 / 细胞基因组 DNA 快速提取试剂盒	肠炎沙门氏菌肠炎亚种鼠伤寒血清型基因组DNA
全血 / 组织 / 细胞基因组 DNA 快速提取试剂盒	肺炎链球菌基因组DNA

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