商品属性：
货号 规格 产品名称 A-Hc2003-50ml×2 50ml×2 TRzol LS（液体样本 RNA 提取试剂） 储存条件：
货号
规格
产品名称
A-Hc2003-50ml×2
50ml×2
TRzol LS（液体样本 RNA 提取试剂）
（5）产物要求：为保证 PCR 产物完整，建议 72℃后延伸 5-10 分钟。连接前使用琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物的质量和纯度，如 PCR 产物为非单一性条带，目的片段一定要切胶回收。如 PCR 产物为单一条带，无引物二聚体，可取 1-3l 的 PCR 产物直接连接。但若扩增模板为质粒 DNA，应注意质粒的抗性。由于 pBM40 载体为卡那抗性，以氨苄抗性的模板质粒扩增的 PCR 产物直接连接后的产物可涂布在卡那抗性的 LB 平板上。以卡那抗性的模板质粒扩增的 PCR 产物应切胶回收后再连接。 （6） 片段用量：胶回收的 DNA 片段一般使用量为 50-100ng。对照片段为 5’端带CACC四个碱基的全长 EGFP 基因的平末端产物，表达产物大小为 32.6kD。 （7） 往 T7 和 T7t 引物干粉管加 100l **水即为 5M 浓度的引物。
1.连接反应 按下表，在一个 0.2ml PCR 管中依次加入
加完试剂后，轻轻混匀低速离心，使溶液集中在管 底。PCR 仪控温 25℃反应 15 分钟，反应结束后， 将离心管置于冰上，等待**转化。如暂时不转化， 可冻存于-20℃。
2. 转化 （1）取 5µl 连接产物到 100µl 刚刚融化的感受态细胞中，轻轻混匀，冰浴 20-30 分钟。 （2）42℃水浴中热击 30 秒钟。 （3）立刻置于冰水浴中 2 分钟。 （4）加入 900µl 无菌的不含***的 SOC 或 LB，37℃，200rpm 振荡培养 60 分钟。 （5）4000rpm 离心 1 分钟，去掉部分上清，保留 100µl 用移液器轻吹菌体，充分悬浮菌液，取全部菌液涂布，然后 37℃培养过夜（12-16 小时）。 3. 阳性克隆鉴定： （1）菌落PCR方法鉴定阳性克隆 A.用10l吸头挑选克隆至预先加有10μl无菌水或LB培养基的PCR管中，吹打混合。 B.在25 l PCR反应体系中加入2μl**悬液为模板、5μM浓度的CMVPfor和SV40PolyArev各1μl，PCR方法鉴定阳性克隆。B.在25l PCR反应体系中加入2μl**悬液为模板、T7和T7t各1μl，PCR方法鉴定阳性克隆。 C.PCR扩增条件：94℃预变性5分钟（裂解细胞，失活核酸酶），94℃变性10 秒钟，55℃退火10秒钟（注：使用基因特异性引物做PCR鉴定时，退火温度则需按其*适温度进行调整），72℃延伸（ 根据片段的大小决定延伸时间，通常每1-2分/1kb），30-35个循环，72℃后延伸5分钟。1%琼脂糖凝胶电泳分析扩增结果，有强烈的明显条带的克隆为重组体，与插入片段大小相近（由于扩增引物在克隆位置的两侧，所以PCR扩增出的DNA的长度比插入片段大349bp）可视为阳性克隆。菌落PCR方法鉴定重组体时一定要设立一个不加菌液的阴性对照。 （2） 限制性酶切分析阳性克隆 pBM30为低拷贝质粒。挑取单菌落接种于8mL含卡那的LB培养液中，过夜培养，小量制备质粒，参考pBM30图谱，选择合适的限制性内切酶（NdeI，Bgl II，Kpn I，NcoI，Xho I），酶切后电泳鉴定重组质粒。 （3） 测序：用T7和T7t对质粒进行测序分析。
公司正在出售的产品：
15min高产全基因组DNA提取试剂盒
乳suan乳球菌PCR试剂盒
中量液RNA磁珠法提取试剂盒(M)
儿茶染料法PCR鉴定试剂盒
毛囊DNA提取试剂盒
沙门氏菌invA 基因荧光PCR检测试剂盒(探针法)
酵母高纯质粒小量快速提取试剂盒 ( 带 lyticase)
痘苗病毒PCR检测试剂盒
中大量浆DNA提取试剂盒
鲤疱疹病毒通用PCR试剂盒
游离RNA提取试剂盒（中提）
犬血巴尔通体PCR试剂盒
样本保存液（带证，灭活型）
热带***PCR检测试剂盒
液核酸磁珠法提取试剂盒（中提）
立克次氏体通用PCR试剂盒
浆（清）RNA磁珠法提取试剂盒
细胞核酸提取试剂盒
犬诺瓦克病毒PCR试剂盒
微生物RNA逆转录试剂盒
水痘带状疱疹病毒PCR检测试剂盒
唾液RNA提取试剂盒
发动蛋白2ELISA试剂盒
拭子DNA提取试剂盒
表面膜**球蛋白DELISA试剂盒
染料法荧光定量PCR试剂盒（抗体修饰）
TRzol LS（液体样本 RNA 提取试剂）补体成分1q子成分AELISA试剂盒
青链霉素双抗液（100×）
丙型肝炎IgMELISA试剂盒