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产品资料

PCR产物纯化回收试剂盒

PCR产物纯化回收试剂盒
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  • 产品名称:PCR产物纯化回收试剂盒
  • 产品型号:A-Hc2024
  • 产品展商:抚生
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简单介绍
PCR产物纯化回收试剂盒公司正在出售的产品:Yeast Nucleoside diphosphokinaseE.coli SSB单链结合蛋白T4 UvsY ProteinPM原代细胞小核酸转染试剂一步染料法RT-qPCR试剂盒miRNA探针法荧光定量PCR试剂miRNA茎环法逆转录试剂盒
产品描述

商品属性:


货号

规格

产品名称

A-Hc2024-100次

100次

PCR产物纯化回收试剂盒

A-Hc2024-100 次×2

100 次×2

PCR产物纯化回收试剂盒

储存条件:


PCR产物纯化回收试剂盒保存条件:本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

产品介绍:


在高离序盐存在的情况下,DNA 片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,*后低盐、高 pH 值的洗脱缓冲液将纯净 DNA 从硅基质膜上洗脱。

产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了上等结合液,不含传统结合液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.结合液调制成为了黄颜色,便于监测 pH 值变化从而达到*佳结合效果,大大提高回收效率。
4.简单快速、使用方便。

 

注意事项:



1.所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在 37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,使用前应该恢复到室温. 2.储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
4.结合液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
5.回收纯化的 DNA 片段一般在 100bp 到 40kb 之间,过长、过短片段的回收效率迅速降低。
6.回收 DNA 的量和起始 DNA 的量,洗脱体积,DNA 片断大小有关。一��� 1-20μg,100bp-5kb 的 DNA 片段,回收率可达 95%。
7.pH 值≤7.5 时,吸附膜吸附 DNA 的效率*高。如果待纯化产物含有碱性物质过多,造成和结合液混和后pH 偏高,会导致回收率降低。混和后,如果结合液依旧保持黄色,说明 pH 正常;如果变成橘红色或者淡紫色,说明 pH 偏高,可加 5-10μl 3M 醋酸钠(pH5.2)将 pH 值调到 5-7(黄色)。
8.洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保 pH 大于 7.5pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱,DNA 片段应该保存在-20℃。DNA 片段如果需要长期保存,可以用 TE 缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是 EDTA 可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
自备试剂:无水乙醇


操作步骤:


提示:**次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1.每 100μl PCR 扩增后体系或者酶切后体系加入 500μl 结合液 BB,充分混匀。(如果初始体系小于 100μl,请事先用双蒸水调整至 100μl)。
2.将上一步所得溶液加入吸附柱 EC 中(吸附柱放入收集管中),室温放置 1min,12,000rpm 离心 30-60sec,倒掉收集管中的废液。
3.加入 500μl 漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇 !),12,000rpm 离心30sec,弃掉废液。
4.重复操作步骤 3。
5.将吸附柱 EC 放回空收集管中,12,000rpm 离心 2min,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
6.取出吸附柱 EC,放入一个干净的离心管中,室温放置数分钟。
7.在吸附膜的中间部位滴加洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中加热
效果更好),室温放置 2min,12,000rpm 离心 1min。如果需要较多量 DNA,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心 1min。(注意:洗脱体积越大,洗脱效率越高。 如果需要 DNA 浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是*小体积不应少于 30μl, 体积过小降 DNA 洗脱效率,减少产量。)

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