高效液相色谱仪测定富马酸和马来酸的含量
用高效液相色谱仪法，在选定的工作条件下，通过色谱柱使样品溶液中各组分分离，用紫外吸收检测器检测，用外标法定量，计算样品中富马酸及马来酸的含量。
1、 试剂和材料
1.1 富马酸：质量分数≥99.0%。
1.2 马来酸：质量分数≥99.0%。
1.3 氢氧化钠溶液：20g/L。
1.4 磷酸溶液：量取磷酸（优级纯）(1±0.02)mL于1000mL容量瓶中，加入100mL甲醇（HPLC级，可根据柱效调整加入量），加水稀释至刻度，再经0.45μm滤膜过滤。
2、 仪器和设备
2.1 高效液相色谱仪系统(HPLC)
2.1.1 高压泵：无脉冲，能将流速保持在0.1mL/min～10.0 mL/min。
2.1.2 定量环：5μL。
2.1.3 紫外光检测器：可变波长。
2.1.4 数据处理系统：色谱工作站或数据处理机。
2.2 抽滤系统
抽滤系统使用孔径为 0.45μm 的纤维素酯膜滤纸（用于流动相的预处理）。
2.3 过滤系统
过滤系统使用孔径为 0.45μm 的纤维素酯膜滤纸（用于样品的预处理）。
2.4 进样器
自动进样器或微量进样器，50μL或100μL。
3、 色谱分析条件
推荐的色谱柱及典型色谱操作条件见表 A.1，富马酸和马来酸测定典型高效液相色谱仪图见附录 C图 C.1，各组分的相对保留时间见附录 C 表 C.1。其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。
4、 分析步骤
4.1 标准样品溶液的制备
4.1.1 富马酸标准样品溶液的制备
称取 50mg 富马酸，准确至 0.0002g,溶于适量水（必要时加入少量氢氧化钠溶液），转移至 50mL容量瓶，用磷酸溶液稀释至刻度。移取上述溶液（1±0.02)mL ,置于 50mL 容量瓶，用磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，经 0.45μm 滤膜过滤，再经超声波脱气处理。
4.1.2 马来酸标准样品溶液的制备
称取 50mg 马来酸，准确至 0.0002g,溶于适量水（必要时加入少量氢氧化钠溶液），转移至 250mL容量瓶，用磷酸溶液稀释至刻度。移取上述溶液（1±0.02)mL ,置于 100mL 容量瓶，用磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，经 0.45μm 滤膜过滤，再经超声波脱气处理。
4.2 样品溶液的制备
称取 0.2 g 实验室样品，准确至 0.0002g, 置于 50mL 容量瓶，以流动相稀释至刻度，摇匀，经0.45μm 滤膜过滤，再经超声波脱气处理。
4.3 测定
按高效液相色谱仪操作规程开机预热,调节温度及流量,达到分析条件并基线平稳后,将标准样品溶液进样。用微量进样器取标准样品溶液 5μL，进样（或自动进样）,记录所得的富马酸或马来酸的峰面积A 2 。
用微量进样器取样品溶液 5μL，进样（或自动进样）,记录所得的待测物质的峰面积 A 1 。
5、 结果计算
富马酸或马来酸的质量分数 w 2 ，数值以%表示，按式(A.3)计算：
…………………………（A.3）
式中：
A 1 —— 样品液中待测物质的峰面积；
A 2 —— 标准样品溶液中富马酸或马来酸的峰面积；
m 2 —— 标准样品溶液中富马酸或马来酸的进样量，单位为微克(μg)；
m —— 样品的进样量,单位为微克(μg)
高效液相色谱仪测定富马酸和马来酸的含量
高效液相色谱仪测定富马酸和马来酸的含量
高效液相色谱仪测定富马酸和马来酸的含量
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