高效液相色谱仪测定苹果酒中苹果酸及乳酸含量
本文系统研究了苹果酒有机酸的高效液相色谱仪分析法，对色谱柱的型号、流动相的配比、流速、检测波长等色谱条件进行了优化 。
1、实验材料
实验室自制的苹果酒样品；L苹果酸(色谱纯)；L一乳酸(色谱纯)；L一苹果酸(分析纯) ；甲醇 (色谱 纯) ；甲酸(色谱纯 )。
2、实验仪器
分析天平0.1mg；
漩涡混合器 ；
数控超声波清洗器 ；
循环式多用真空泵 ；
高效液相色谱仪 ，配紫外检测器 ；
pH计 。
3、样品预处理
将苹果酒样品在室温静置平衡后 ，先经滤纸过滤 ，再经0.45um微孔滤膜过滤，稀释 3.3倍 ，直接进样 。
4、仪器及其条件
色谱柱：C18 (3.5um X4.6mm ×75mm )；
柱温：25℃ ；
流动相：0.1%甲酸 + 3%甲醇 ，使用前经过0.45um混合纤维树脂膜抽真空过滤 ；
流速 ：0.5mL／min ；
进样量 ：20ul；
检测波长：210nm 。
有机酸定性：将苹果酒提取液色谱图与苹果酸、乳酸标准品色谱图进行对照，根据保留时间初步确定苹果酒中有机酸种类，同时用加样外标法和光谱图数据进行辅助定性
有机酸定量：配制L一苹果酸和L一乳酸的混合标液作为母液，依次稀释得到6个浓度 (苹果酸5000、4000 、3000、2000、 1000 和 500mg／L ；乳酸 2000 、 1500、 1000 、500、 200 和 100mg／L )。
各浓度梯度的混合标样按照高效液相色谱仪分析条件进行实验，每个水平点重复进样3次，以峰面积 (Y) 对质量浓度(X，mg／L)作图，绘制出标准曲线 。
5、色谱柱的选择
在苹果酒的有机酸高效液相色谱仪检测中，重要的是优选有机酸的色谱分离条件，这些条件涉及 色谱柱型号 、流动相配比、流速 、检测波长等 。
液相色谱柱是高效液相色谱仪的分离系统，在混合物中各组分准确定性定量方面起着重要的作用，为了使苹果酒在高效液相色谱仪上有良好的分离效果，首先对使用的色谱柱进行了优选 。
本实验选 用了3 种型号的柱子 ，即
①C18柱 ，5um ×4.6mm× 250mm ；
② T3柱，5um × 4.6mm ×250mm；
③ C18柱，3.5um ×4.6mm ×75mm 。
以苹果酸一乳酸混合标样及自制苹果酒为样品考察了3 种柱子的分离效果，在相同的洗脱程序下进行测试，得到的色谱图，在相同的分析时间下T3 柱具有更好的分离效果；而考虑分离效果近似的情况下 ，C18柱能在*短的时间内将苹果酸和乳酸有效分离，只需12min即可分析一个样品。这是由于所 的 C18 柱(3.5um ×4.6mm ×75mm) 是一种快速分离色谱柱 ，该柱颗粒粒径比普通柱要小，为 3.5um 。快速分离柱高效液相色谱仪与传统高效液相色谱仪相比，具有分离时问短 ，分析速度快，流动相消耗小，分析成本低等优点。为高效地完成测试工作，本研究在各峰分离效果较好的前提条 件下，尽可能让所需的分离时间缩短，因此我们*终选择了 C18(3.5um ×4.6mm ×75mm) 柱作为实验用分析柱
高效液相色谱仪测定苹果酒中苹果酸及乳酸含量
高效液相色谱仪测定苹果酒中苹果酸及乳酸含量
高效液相色谱仪测定苹果酒中苹果酸及乳酸含量
高效液相色谱仪测定苹果酒中苹果酸及乳酸含量