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高效液相色谱仪测定山楂中的有机酸含量

高效液相色谱仪测定山楂中的有机酸含量

本文利用高效液相色谱仪对山楂中几种水溶性有机酸进行了分析，结果稳定，可靠，可为山楂的质量控制提供参考。

1、仪器与试剂

高效液相色谱仪，配紫外检测器、柱温箱、及自动进样器组成。

酒石酸、草酸、苹果酸、抗坏血酸、柠檬酸、琥珀酸等有机酸对照品均为分析纯；

磷酸二氢钠及磷酸为分析纯；

水为高纯水；

流动相经0.45um 滤膜过滤。

2、对照品及供试品溶液的制备

准确称取各有机酸对照品适量（草酸 12.5mg，酒石酸25mg，苹果酸50mg，抗坏血酸5mg，柠檬酸250mg，琥珀酸5mg），加50mL水溶解，采用逐级稀释法配成一系列浓度的混合标样；

准确称取山楂样品粉末（过 0.45mm孔径筛）约1g，置小烧杯中加适量水，超声提取0.5h，过滤后定容于50mL容量瓶中，取适量过0.45um滤膜，制成供试品溶液。

3、色谱条件

色谱柱：ODS2（4.6mmX250mm，5um）；

流动相：磷酸二氢钠-磷酸缓冲液（pH=2. 6）；

流速：0.8mL/min；

检测波长：210nm；

柱温：25℃；

进样量：10uL。

4、实验条件优化

采用纯水提取法提取水溶性有机酸，提取效率高，方法简便，药典中规定方法是室温浸泡，所需时间比较长。

本实验采用超声提取法，分别考察了 20、30、40min 的提取率。实验结果表明，超声时间太短，有些物质未提取出来或提取不充分，提取时间太长，色谱图又没有明显差异，因此，根据色谱峰个数、峰面积及经济角度，提取时间以 30 min 为佳。

对水溶性有机酸的分离，无需有机相仅有水相即可获得满意的分离效果，而且在这种条件下，对色谱柱也没有损害。但是，通常情况下，流动相中需要加入酸抑制剂调节 pH值来抑制有机酸的解离。

流动相 pH值较低时对硅胶柱的键合相不利，且对柱子损害较大，而流动相 pH>3 时，峰基本无分离。因此，本实验选择流动相 pH值为 2. 6。在本实验的有机酸检测波长 210nm下，甲酸和乙酸自身的紫外吸收会干扰有机酸的测定，而磷酸盐缓冲液在紫外区几乎无吸收，选择磷酸二氢钠和磷酸缓冲体系调节pH值；流速较大时出峰时间差别较小且分离效果较差，本实验确定流速为 0. 8 mL/ min。

高效液相色谱仪测定山楂中的有机酸含量

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