高效液相色谱仪测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量
1、原理
试样用水溶解，乙睛定容后，经0.45um 滤膜过滤，高效液相色谱仪配示差折光检测器测定，外标法定量。
2、试剂和材料
2.1 乙睛:色谱纯。
2.2 水:GB/T 6682规定的上等水。
2.3 果搪、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准物质:纯度≥99% .
2.4 果糖、葡萄糖标准储备溶液:准确称取5g果糖标准物质和4 g葡萄糖标准物质，准确至0.0001 g，放入同一100 mL 容量瓶中，加人60 mL水溶解，用乙腈定容至体积，摇匀。
2.5 蔗糖、麦芽糖标准储备溶液:分别称取2g蔗糖和2g麦芽糖标准物质，准确至0.0001g，放人同一100 mL容量瓶中，加人60 mL水溶解，用乙腈定容至体积，摇匀。
2.6 果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准工作溶液:吸取不同体积的果糖、葡萄糖标准储备溶液(2.4)和蔗糖、麦芽糖标准储备溶液( (2.5)，用乙睛十水( (40+ 60)稀释至体积，配成不同浓度的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准工作溶液，用于绘制标准工作曲线。
3、仪器
高效液相色谱仪:配有示差折光检测器。
分析天平:感量0.1 mg 和0.001g各一台。
注射器:10 ml。
有机相过滤膜:0.45um。
样品瓶:1.5mL。
容量瓶:10mL ,25mL ,50mL，100mL。
4、试样制备与保存
4.1 试样的制备
对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过 60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出0.5 kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。
4.2 试样的保存
将试样于常温下保存。
5、测定步骤
5.1 提取
称取5g试样，准确至0. 001 g。置于100 ml 烧杯中，加人30 mL 水，用玻璃棒搅拌使试样完全溶解，转移至 100 ml 容量瓶中，然后再用 10 mL 水洗烧杯三次并转移至上述 100 mL 容量瓶中，用乙睛定容至体积，混匀。用0.45um 滤膜将样液过滤人样品瓶中供高效液相色谱仪测定。
5.2 测定
5.2.1 液相色谱条件
a) 色谱柱：碳水化合物分析柱，10um , 300mm X 3.9 mm;
b) 流动相:乙睛+ 水( (77+ 23);
c) 流速:1.0ml/min ;
d) 柱温 ;25℃;
e) 检测器池温度:35℃ ;
f) 进样量,15uL。
5.2.2 液相色谱测定
用配制的果搪、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准工作溶液绘制以峰高为纵坐标，工作溶液浓度为横坐标的标准工作曲线，保证样品溶液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的响应值均应在标准工作曲线的线性范围内，样品溶液与标准工作溶液等体积进样进行测定。
6、结果计算
结果按以下式计算:
式中:
X— 试样中被测组分含量单位为克每百克(g/100g);
c— 从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为克每百毫升(g/100 mL);
V一 样品溶液定容体积 单位为毫升(mL) ;
m— 所称试样的质量，单位为克(g)。
高效液相色谱仪测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量
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