高效液相色谱仪测定饲料中三聚氰胺的含量
本文优化了高效液相色谱仪测定饲料中三聚氰胺的色谱分离条件。该方法线性关系良好, 有较高的回收率和较好的精密度, 饲料中杂质峰对三聚氰胺出峰干扰少, 方法简单, 易于操作, 准确度与精密度符合要求, 可用于配合饲料中三聚氰胺的检测。
1、仪器
高效液相色谱仪, 配紫外检测器及色谱工作站;
氮吹仪;
振荡器、 旋涡振荡器及均质器;
电子分析天平, 感量为 0.0001g ;
冷冻离心机;
0.45μm 针筒式微孔滤膜过滤器,
超声波清洗器,
混合型阳离子交换柱, 60mg/3mL ,
固相萃取仪,
pH 计。
2、试剂
三聚氰胺对照品 ：含量为 99.0%),
乙腈、甲醇与庚烷磺酸钠为色谱纯,
氨水、乙酸、乙酸铅等均为分析纯, 实验用水为超纯水。
3、溶液配制
3.1：1% 乙 酸 溶 液 : 量 取 5mL 冰 乙 酸 于500mL 容量瓶, 加水稀释并定容至刻度。
3.2：5% 氨水甲醇溶液: 量取 5mL 氨水于100mL 容量瓶, 加甲醇定容至刻度。
3.3：乙酸铅溶液 22g/L : 取 11g 乙酸铅用300mL 水溶解后定容到 500mL 。
3.4：20% 甲醇溶液: 取 200mL 甲醇, 加入800mL 水, 混匀。
3.5：流动相: 取 2.02g 庚烷磺酸钠于 1L 容量瓶中, 用水溶解并稀释至刻度, 加乙酸调 pH 到 3.3 。取该溶液 850mL , 加入 150mL 乙腈, 混匀, 过滤、脱气。
3.6：三聚氰胺标准贮备液: 准确称取三聚氰胺对照品 0.0505g 于 50mL 溶量瓶中, 用甲醇溶液超声溶解并定容, 即为 1 000μg/mL 三聚氰胺标准贮备液。
3.7：三聚氰胺标准工作液: 取适量三聚氰胺标准贮备液, 用甲醇溶液稀释使成浓度为 1.0μg/mL 、 5.0μg/mL 、 10.0μg/mL 、 25.0μg/mL 、 50.0μg/mL 5个标准系列。
4、色谱条件
色谱柱：C8 柱 ( 4.6mm×250mm , 5μm ) ;
流速 1.0 mL/min ;
进样量: 20μL ;
柱温: 30℃ ;
检测波长: 240nm 。
5、试验方法
样品处理方法: 饲料样品用匀浆机混碎,称取 5.0g 试样 ( 准确至 0.01g) 于 150mL 具塞锥形瓶中, 准确加入 50mL1% 乙酸溶液, 加入 2.0mL 乙酸铅溶液, 摇匀, 超声提取 20min 。静止2min , 取上层液约 30mL 于 50mL 具塞离心管中, 10 000r/min 离心 5min 。
取上清液 10mL 分次过预先经 3mL 甲醇和 3mL 水活化的 Strata- X- C柱,再用 3mL 水和3mL 甲醇洗涤固相萃取柱, 抽干后用 3 mL 氨水甲醇溶液洗脱 , 50℃ 氮气吹干, 准确加入 2.0mL 甲醇溶液, 旋涡振荡 1min, 过0.45μm 滤膜后上高效液相色谱仪测定。
高效液相色谱仪测定饲料中三聚氰胺的含量
高效液相色谱仪测定饲料中三聚氰胺的含量
高效液相色谱仪测定饲料中三聚氰胺的含量
高效液相色谱仪测定饲料中三聚氰胺的含量