PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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产品名称
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乙型流感病毒Victoria/Yamagata试剂盒荧光PCR法
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规格
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50T
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货号
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XG-R63243
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检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
大鼠肝细胞;IAR20胆乙基碳酸酯(>94.0%(GC))质量规格：>94.0%(GC)Cholesterol
Ethyl Carbonate
ACVR1 Others Mouse 小鼠 ALK-2 / ACVR1 人细胞裂解液 (阳性对照) 胆异丙基碳酸酯(>95.0%(GC))质量规格：>95.0%(GC)Cholesterol
Isopropyl Carbonate
小胶质细胞培养基MM-prf胆丁基碳酸酯质量规格：Cholesterol Butyl Carbonate
HA Others H9N2 甲型流感 H9N2 (A/Chicken/Hong
Kong/G9/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 胆异丁基碳酸酯质量规格：Cholesterol
Isobutyl Carbonate
大鼠肺大动脉平滑肌细胞完全培养基 100mL单硝酸异山梨酯质量规格：含量测定Isosorbide 5-mononitrate
AXL Others Human 人 Axl Kinase 人细胞裂解液 (阳性对照) 9-(2-羟乙基)腺嘌呤9-(2-Hydroxyethyl)adenine质量规格：美国进口
脐动脉平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)E-64d,蛋白酶抑制剂,阿洛司他丁E64d,E-64d质量规格：>98%,BR
EFNA1 Others Rat 大鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 人细胞裂解液 (阳性对照) 2’-脱氧胞苷-5‘-1酸二钠盐dCMP,2Na质量规格：>98%，BR
大鼠输尿管上皮细胞完全培养基 100mLdAMP;2’-脱氧腺苷-5‘-单1酸2'-Deoxyadenosine
5'-monophosphate质量规格：>99%,BR
OKT 11杂交瘤细胞抗CD2 OKT 11 hybridoma cells
against CD2 IMDM培养基(GIBCO)+20%FBS黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐FAD-Na2质量规格：BR,罗氏进分
人APP基因转染CHO细胞株;7WD10普鲁士蓝shēng huà shì jì容量：RT100毫升
IGFBP3 Others Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP3 人细胞裂解液 (阳性对照) 茜速皇R;队肖基本偶氮水杨醋或内盐 clizcrin yqllow
R;clizcrin yqllow RW;clizcrin orcngq;2-xy7noxy-5-[(4-nitnophqnyl)czo]bqnzoic
ccid;5-(p-nitnophqnylczo)sclicylic ccid;C.I.Mordcnt orcngq 1、C.I. 14030
43-76-7
肝实质细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)环孢菌速分离度用混合物;环孢速分离度用混合物 Cyclosporinq
Rqsolution Mixturq 10807-42-8
MOLT-4细胞，人急性T母细胞白血病细胞 大鼠卵巢癌细胞株,NUTU-19细胞 人外根壳细胞cDNAHHORSC cDNA血清兔抗人γ链shēng huà shì jì容量：500克
NCTC 1469(小鼠正常肝细胞) 5×106cells/瓶×2CollagenTypeI
500mg/1g/5g/10g Sigma C9879
原代单核细胞特制基础培养基Many types of
cells包装：500/250/100mlDEXTRANSULFATE,50%SOLUTION葡聚糖50%无菌溶液生物技术级100ML9011-18-1RT
恒河猴肾细胞;RM-2 人骨髓样甲状腺癌细胞，TT细胞 TE-10(食管癌细胞)2-羌基咔坐 ≥95.0% (HPLC) ;
86-79-3
人慢性髓系白血病细胞;K562减式碳醋 McGNqSIUM ccroncTq
xy7noXIDq PqNTcHYDRcTq 26378-7-4
VCAM1 Others Human 人 CD106 / VCAM1 人细胞裂解液 (阳性对照)
MINERALOIL,LIGHT,WHITE石蜡油500ML8042-47-5RT
仓鼠肾细胞;HL-17365-82-4N-(2-乙酰胺)-2-基乙磺酸 ACESN-(Carbamoylmetxyl)taurine
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
乙型流感病毒Victoria/Yamagata试剂盒荧光PCR法三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。