禽流感病毒N9亚型试剂盒荧光PCR法

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
人表皮色素细胞-深色素总RNAHEM-d NAL-谷氨酸二甲酯盐酸盐质量规格：0.98L-Glutamic acid dimethyl ester

盘羊皮肤细胞;ASHS2 中国仓鼠二氢叶酸还原酶缺陷细胞，CHO/dhFr-细胞 Ca763细胞，615小鼠癌瘤株L-亮氨酸甲酯盐酸盐质量规格：0.98L-Leucine methyl ester

转化细胞L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐质量规格：>99%,BRL-Phenylalanine methyl ester

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Egypt/N05056/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) KC-5103质量规格：>98.5%,BR,可用于细胞培养Tifluadom/KC-5103

CL-0322Beta-TC-6(小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞)5×106cells/瓶×2盐酸伐昔洛韦/盐酸万乃洛韦质量规格：>99%,BRValacyclovir HCl
CD274 Others Rat 大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人细胞裂解液 (阳性对照) 达沙替尼羧酸Dasatinib Carboxylic Acid质量规格：美国进口

小鼠树突状细胞肉瘤低转移细胞(绿色荧光蛋白标记);DG6-GFPN-去甲基加兰他敏N-Desmethyl Galanthamine质量规格：美国进口

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-B5 I型胶原酶(含100mL酶解缓冲液) 10mLO-去甲基加兰他敏O-Desmethyl Galanthamine质量规格：美国进口

Saos-2，人成骨肉瘤细胞 HumanO-去甲基加兰他敏β-D-葡萄糖苷酸O-Desmethyl Galanthamine β-D-Glucuronide质量规格：美国进口

EM2 Others Mouse 小鼠 EM2 人细胞裂解液 (阳性对照) 异吉非罗齐（吉非罗齐杂质）iso-Gemfibrozil (Gemfibrozil Impurity)质量规格：美国进口
小鼠胰腺癌细胞(B类);Pan02 透明质酸酶(含100mL酶解缓冲液) 10mL4-溴芘(>95.0%(GC))质量规格：>95.0%(GC)4-Bromopyrene

A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株 Human1,6-二氨基芘(>98.0%(HPLC)(N))质量规格：>98.0%(HPLC)(N)1,6-Diaminopyrene

PLA2G1B Others Human 人 PLA2G1B / PLA2 人细胞裂解液 (阳性对照) 1,3-二氨基芘质量规格：1,3-Diaminopyrene

人小胶质细胞RNAHM miRNA5 μg2,7-二叔丁基芘(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)2,7-Di-tert-butylpyrene

CFD Others Human 人 CFD / Adipsin 人细胞裂解液 (阳性对照) 1-溴甲基萘质量规格：>99%1-(Bromomethyl)naphthalene
C127(小鼠癌细胞) 5×106cells/瓶×2Campy-Cefex琼脂基础shēng huà shì jì容量：2～8℃100毫升

CN2 Others Human 人 CN2 / Coactin-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 11-基十一烷酸 11-Aminoundecanoic acid,97% 2432-99-7 25G 通用试剂

大鼠骨骼肌成肌细胞;L6半纤维速酶(-20℃) HqMICqLLULcSq 902-26-3

BCAM Others Mouse 小鼠 BCAM 人细胞裂解液 (阳性对照) VANCOMYCINxy7noCHLORIDE盐酸万古霉素美国药典级白色粉末FROZENsigma

BGC-823 人低分化前胃癌细胞531-91-9N,N-二本基联本胺N,N'-Dipxenylbenzidine
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
禽流感病毒N9亚型试剂盒荧光PCR法将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。