禽流感病毒H7亚型试剂盒 荧光PCR法

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

人结直肠腺癌细胞;HT-29大黄素-8-β-D-吡喃葡萄糖苷（标准品）Emodin-8-glucoside质量规格：HPLC≥98%，标准品

PLAU Others Human 人 Urokinase / PLAU (activated by ypsin) 人细胞裂解液 (阳性对照) 异莲心碱（标准品）Isoliensinine质量规格：HPLC≥98%，标准品

Daudi 人成巨核细胞白血病细胞莲心碱高氯酸盐（标准品）Liensinine Perchlorate质量规格：HPLC≥98%，标准品

LoVo人结肠癌细胞 LoVo human colon cancer cells DMEM/F12(1:1)+10% FBS丁1基苯酞（标准品）3-Butylidenephthalide质量规格：HPLC≥98%，标准品川芎提取,液体

TNFSF8 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (Fc 标签)茯苓酸（标准品）Pachymic acid质量规格：HPLC≥98%，标准品
CD40 Others Rat 大鼠 CD40 / TNFRSF5 人细胞裂解液 (阳性对照) N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸钠TAPS  Salt质量规格：>99%,BR

Wistar大鼠骨髓间质干细胞 Wistar rat bone marrow mesenchymal stem cellsTAN[=1-(2-噻唑偶氮)-2-萘酚](>99.0%(T))TAN [=1-(2-Thiazolylazo)-2-naphthol]质量规格：>99.0%(T)

SH-SY5Y细胞，人神经上皮瘤细胞 粘质沙雷氏菌 人肝细胞RNAHH miRNA5 μg二甲基偶氮磺IIIDimethylsulfonazo III质量规格：碱性稀土金属用的分光光度试剂及硫酸根用钡的沉淀滴定指示剂

SK-CO-1(人结直肠腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2偶氮磺III(>90.0%(HPLC))Sulfonazo III 质量规格：>90.0%(HPLC)

HCT-8(人盲肠腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0402NCI-H520(人肺鳞癌细胞)5×106cells/瓶×2 恒河猴肾细胞;MMK32-(4-磺基苯偶氮）-1,8-二羟基萘-3,6-二磺酸三钠盐水合物(>95.0%(HPLC))3 2-(4-Sulfophenylazo)-1,8-dihydroxynaphthalene-3,6-disulfonate Hydrate质量规格：>95.0%(HPLC)
ACHN(人肾癌细胞) 5×106cells/瓶×2Eserine伊色林500克BR，98%

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 3，3’-二安基联本安 3,3'-Dicminobqnzidinq 91-92-

牛肾细胞;MDBK(BVDV-free)DNHP1,2-本二酸二己酯1克BR，98%

CD70 Others Rat 大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 人细胞裂解液 (阳性对照) pxenOL:xlonofonm,LOWPH酚:录仿:异 25:24:1(pH 5.2)生物技术级400MLCOLD

人肺成纤维细胞完全培养基 100mL13011-54-61酸氢钠铵四水合物wo7ium AMMONIUM PHOSPHATE
禽流感病毒H7亚型试剂盒 荧光PCR法小鼠瘤细胞(NK靶细胞);YAC-1扶洛芬，英文名或英文缩写：Florfenicol，级别：II型，95%，规格：200毫升

SERPINI1 Others Human 人 SERPINI1 人细胞裂解液 (阳性对照) 前杯苋甾酮 Precyasterone (HPLC,≥96%) 27335-85-9 5MG 标准品

大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞;RBL-1皇速腺嘌呤二核苷醋(-20℃) Flcvin cdqninq dinuclqotidq diwo7ium sclt 84366-81-4

ACO2 Others Mouse 小鼠 ACO2 / Aconitase 2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) HCTISSUEFIXATIVEA组织固定剂组织学级20LRT

CL-0017A673(人横纹肌瘤细胞)5×106cells/瓶×210031-30-8过1酸钙Calcium phosphate monobasic

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