副流感病毒3型试剂盒荧光PCR 法

产品特点: 本产品只适用于���研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)敌稗标准溶液(0.100mg/ml)质量规格：0.100mg/mlPropanil solution

293sars181A细胞，Sars蛋白表达株 人细胞,HBL-100细胞 肾系膜细胞培养基MCM-prf伏杀(标准品)质量规格：分析标准品Phosalone

大额牛皮肤成纤维样细胞;BOS-2丙磺舒（标准品）质量规格：>98%,标准品Probenecid

IL2RB Others Human 人 IL2Rβ 人细胞裂解液 (阳性对照) 诺氟沙星质量规格：>99,USP,BR,可用于细胞培养Norfloxacin

CM-H020人胰岛β细胞完全培养基100mL诺氟沙星（标准品）质量规格：HPLC>98%,标准品Norfloxacin
CL-0382MDA-MB-415(人癌细胞)5×106cells/瓶×2丹酚酸B（标准品）Salvianolic acid B质量规格：HPLC≥98%，标准品

人结直肠腺癌细胞;SW620 [SW 620;SW-620] 大鼠成纤维细胞完全培养基 100mL丹酚酸C（标准品）Salvianolic acid C质量规格：HPLC≥98%，标准品

EAC 小鼠艾氏腹水癌细胞丹酚酸D(标准品)Salvianolic acid D质量规格：HPLC≥98%，标准品

IL17F Others Human 人 IL-17F / Ierleukin-17F 人细胞裂解液 (阳性对照) 胆(标准品)Cholesterol质量规格：HPLC≥98%，标准品

人晶体上皮细胞永生系;SRA01/04(HLE)胆Cholesterol质量规格：>95%,BR
95-D细胞，人高转移肺癌细胞 转血小板基因仓鼠卵巢细胞,CHO-pt细胞 CM-M018小鼠颌下腺上皮细胞完全培养基100mL哌拉西林（标准品）质量规格：HPLC含量测定Piperacillin

SCaBER(人膀胱鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2哌拉西林质量规格：>95%,BRPiperacillin

Gibco 17001-074 TM-C100 Basal Medium,liquid 450ml邻氯青霉素 ;氯唑西林钠(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Cloxacillin  Salt Monohydrate

人微血管内皮细胞cDNAHDMEC cDNA邻氯青霉素 ;氯唑西林钠质量规格：干品Cloxacillin>90%,一水Cloxacillin  Salt Monohydrate

HDAC8 Others Mouse 小鼠 HDAC8 / HDACL1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 7-Deaza-7-I-2’-dA质量规格：>97%,进分7-Deaza-7-I-2’-dA
EB病毒转化的人B细胞;KMY0906 人内脏脂肪细胞完全培养基 100mLRIBORESERVERNASTORAGESOLUTIONRNA贮存液生物技术级无色透明溶液COLDsigma

间充质干细胞成骨细胞分化生长添加物MODS1,6-二1酸果糖一钙盐 D-Fructose-1,6-diphoshate calcium salt 103213-33-8 5G 通用试剂

IL13RA1 Others Rat 大鼠 IL13RA1 人细胞裂解液 (阳性对照) 富马醋;反二醋;;紫堇醋;1，2-1二羧醋 FuMcric ccid;Bolqtic ccid;Lichqnic ccid;trcns-1,2-qthylqnqdiccrboxylic ccid 110-17-8

人牙周膜成纤维细胞完全培养基 100mLAmmoniumfluoroborate四扶合硼酸25克高，98%

T6-Swiss albino细胞，小鼠胚胎成纤维细胞 B16(小鼠色素瘤细胞) 非洲绿猴肾细胞;BS-C-144-44-(易-3)(易)potewwium permanganate
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
副流感病毒3型试剂盒荧光PCR 法将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

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