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产品资料

腺病毒3型试剂盒荧光PCR法

腺病毒3型试剂盒荧光PCR法
  • 如果您对该产品感兴趣的话,可以
  • 产品名称:腺病毒3型试剂盒荧光PCR法
  • 产品型号:XG-R63296
  • 产品展商:西格
  • 产品文档:无相关文档
简单介绍
腺病毒3型试剂盒荧光PCR法保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
产品描述

PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
产品特点: 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断
灵敏度高:可检测个位拷贝数的基因
特异性高:有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高:复孔间差异小,实验结果重复性强
扩增性能优:扩增效率高,荧光信号强

产品名称

腺病毒3型试剂盒荧光PCR

规格

50T

货号

XG-R63296

储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内**的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤高压。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。

检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

直肠粘膜上皮细胞Many types of cells包装:5 × 105(1ml)甲氧苄啶(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Trimethoprim

非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS5B;Vero-HCV-NS5B 人卵巢癌细胞,SK-OV-3[SKOV-3]细胞 BT549(管癌细胞)西维来司钠质量规格:含量大于98.5%Sivelestat 

人肺腺癌细胞;Calu-3醋甲唑胺(标准品)质量规格:HPLC99.0%,标准品Methazolamide

IL3RA Others Human IL3RA / CD123 人细胞裂解液 (阳性对照) 齐拉西酮质量规格:含量≥99%Ziprasidone

CM-H029人脐带单核细胞完全培养基100mL塞曲司特/西拉达司/塞拉司特质量规格:含量≥98.0%Seratrodast
CM-H083
人脐动脉内皮细胞完全培养基100mL胆碱非诺贝特Choline Fenofibrate质量规格:美国进口

Hepa 1-6, 小鼠肝癌细胞丙磺舒酰基β-D-葡萄糖苷酸Probenecid Acyl β-D-Glucuronide质量规格:美国进口

人癌细胞;MDA-MB-453 人角膜成纤维细胞完全培养基 100mL诺氟沙星-d5Norfloxacin-d5质量规格:美国进口

人口腔角质细胞cDNAHOK cDNA4-含氧诺氟沙星4-Oxo Norfloxacin质量规格:美国进口

CCL17 Others Mouse 小鼠 CCL17 / TARC 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) N-羟基诺氟沙星N-Hydroxy Norfloxacin质量规格:美国进口
RBE,
人肝胆管癌细胞6-去氟-6-羟基利培酮质量规格:美国进口6-Desfluoro-6-hydroxy Risperidone

HUVEC, 人脐静脉内皮细胞7-羟基利培酮质量规格:美国进口7-Hydroxy Risperidone

B母细胞;HMy2.CIR 人前列腺平滑肌细胞完全培养基 100mL羟基利托那韦质量规格:美国进口Hydroxy Ritonavir

人正常肝细胞;L-02去噻唑基甲氧基碳酰 利托那韦质量规格:美国进口Desthiazolylmethyloxycarbonyl Ritonavir

DDR1 Others Mouse 小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 9'-去甲格拉司琼(格拉司琼杂质C)质量规格:美国进口9'-Desmethyl Granisetron (Granisetron Impurity C)
间充质干细胞生长添加物MSCGS偶氮录嶙Ⅳ,英文名或英文缩写:CPA-Ⅳ,级别:色固,规格:25

C2 Others Mouse 小鼠 C2 / Compleme Compone 2 人细胞裂解液 (阳性对照) BOC-L-半胱安醋 BOC-CYS-OH 0887-92-0

腺病毒3型试剂盒荧光PCRB细胞瘤细胞;RAMOS(RA.1)细胞核坚牢红,英文名或英文缩写:Nuclear fast red,级别:色固,规格:250毫克

大鼠垂体瘤细胞;GH3 膀胱移行细胞癌细胞,T24细胞 MDBK (NBL-1)细胞,牛肾细胞纤维玻璃,英文名或英文缩写:Glass Fiber,级别:BR99%,规格:25

HNE2, 人鼻咽癌细胞系 HumanN-Octyl-b-D-Thioglucopyranoside 1g 原装 Amresco J575


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