PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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产品名称
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绿脓杆菌试剂盒荧光PCR法
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规格
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50T
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货号
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XG-R63323
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检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
小鼠腮腺细胞完全培养基 100mLL-谷氨酸5乙酯质量规格：0.985H-Glu(OEt)-OH
HUVEC[HUV-EC-C]人脐静脉内皮细胞 Human umbilical vein
endothelial cells HUVEC[HUV-EC-C] DMEM+10%FBSN-乙酰-DL-亮氨酸质量规格：0.98N-Acetyl-DL-leucine
IL18BP Protein Mouse 重组小鼠 IL18BP 蛋白 (His 标签)N-碳苄氧基赖氨酸,N6-Cbz-L-赖氨酸质量规格：98%，BRN6-Cbz-L-Lysine
PA-1(人卵巢腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 H9c2(2-1)(大鼠心肌细胞)DL-赖氨酸质量规格：>98%,BRDL-Lysine
CL-0269CW-2(人结肠癌细胞)5×106cells/瓶×2DL-精氨酸盐酸盐质量规格：>98%,BRDL-Arginine
CRT(人神经胶质瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 肠静脉内皮细胞Many types of
cells包装：5 × 105方(1ml)草酸亚锡(>98%,BR)Tin
(II) oxalate质量规格：>98%,BR
人脊髓星形胶质细胞HA-sp二氧化锡(> 99%,BR)Tin (IV) oxide质量规格：> 99%,BR
IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人细胞裂解液 (阳性对照) 硫酸亚钛(>98%,BR)Titanium
(III) sulfate质量规格：>98%,BR
犬肾细胞;MDCK(NBL-2)硫酸钛(>96%,BR)Titanium (IV)
sulfate质量规格：>96%,BR
801-D细胞，人巨细胞性肺癌细胞 转入Tet-off调控，含EGFP基因的CHO细胞,CHO-AA8细胞 CM-M026小鼠骨髓基质细胞完全培养基100mL柠檬酸三丁酯(>98%,BR)Tributyl 质量规格：>98%,BR
NCI-H1395人肺腺癌细胞 Human lung adenocarcinoma
cell line NCI-H1395 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS[Tyr9]- β-促 (猪)质量规格：>95%,BR[Tyr9]- β-MSH (porcine)
FAM3D Protein Human 重组人 FAM3D 蛋白 (His 标签)α-心钠素(1-28), human质量规格：>95%,BRα-ANF(1-28), human
293来源病毒包装细胞;ΦA 人上皮细胞完全培养基 100mLα-促质量规格：>95%,BRα-MSH
人髓核细胞总RNAHNPC NAβ-淀粉样蛋白(1-42),人质量规格：>95%,BRβ-Amyloid Peptide
(1-42), human
REG1A Others Cynomolgus 食蟹猴 REG1A / PSPS 人细胞裂解液 (阳性对照) [Nle8’18,Tyr34]-甲状旁腺(7-34)酰胺 (牛)质量规格：>95%,BR[Nle8’18,Tyr34]-pTH
(7-34) amide (bovine)
CL-0252A2(人腺样囊性癌细胞)5×106cells/瓶×2本扎录，英文名或英文缩写：HDBAC，级别：IND，规格：25克
人低分化肺腺癌细胞;SK-LU-1 大鼠脑静脉血管内皮细胞完全培养基 100mL雌摸司汀鳞醋内 (17-bqtc)-qstrc-1,3,5(10)-triqnq-3,17-diol 3-(bis(2-chloroqthyl)ccrbcmctq)
17-(dixy7nogqnphosphctq) diwo7ium sclt 202-73-9
MMQ 小鼠垂体瘤细胞申醋 LqcD(II) cRSqNcTq 3687-31-8
TIMP2 Others Human 人 TIMP2 / TIMP-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-甲基-1H-咪唑，英文名或英文缩写：4-metxylimidazole，级别：LR，规格：500克
色素细胞生长添加物(不含TPA)MelGS-22304-96-3N-苄氧羰基-L-天冬碱N-Benzyloxycarbonyl-L-asparagine
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
绿脓杆菌试剂盒荧光PCR法三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
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