腹泻类8种病毒试剂盒荧光PCR法

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

中国仓鼠肺细胞;R 1610 [R1610]司坦唑醇质量规格：>94%,BRStanozolol

ULBP2 Others Human 人 ULBP2 / N2DL-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 司坦唑醇（标准品）质量规格：含量测定Stanozolol

KG-1 人髓性红白血病细胞苯妥英钠（标准品）质量规格：含量测定Phenytoin

HeLa 229人细胞 HeLa 229 human cervical cancer cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS辛可尼丁（标准品）质量规格：供检查用Cinchonidine

HGF Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白水杨酸-4-辛基苯酯(>95.0%(GC))质量规格：>95.0%(GC)4-Octylphenyl Salicylate
HIC(人小肠癌细胞) 5×106cells/瓶×2胆酸Cholic acid质量规格：≥98%,BR，无水

ACE2 Others Human 人 ACE2 / ACEH 人细胞裂解液 (阳性对照) 胆酸(标准品)Cholic acid质量规格：HPLC≥98%，标准品

人口腔角质细胞HOK党参炔苷（标准品）Lobetyolin质量规格：仅供鉴别用

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/England/195/2009) HA 人细胞裂解液 (阳性对照) α-倒捻子素(标准品)α-mangostin质量规格：HPLC≥98%,标准品

KMB17 人胚肺成纤维细胞地奥司明(标准品)Diosimin质量规格：HPLC≥98%，标准品
C57BL/6小鼠脂肪间质干细胞 C57BL/6 mouse adipose mesenchymal stem cells二氧化铜，英文名或英文缩写：Cupric oxide，级别：AR，99%，规格：500克

BE(2)C细胞，人神经母细胞瘤细胞 乙型溶血性链球菌 人胚肝二倍体细胞;CCC-HEL-1叔丁氧羰酰丁二 N-(tert-Butoxycarbonyloxy)succinimide,... 13139-12-3 5G 通用试剂

Sp2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤细胞) 5×106cells/瓶×2乳醋 litxium LcCTcTq 867-22-0

HEp-2(人喉表皮样癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0450SW 982(人滑膜肉瘤细胞)5×106cells/瓶×2 人上皮细胞;MCF-10AFerron高铁试剂250克3.5N

人慢性髓系白血病细胞;K562本;大;;甲氧基本;甲基本基Anisole;metxoxybenzene
CDH2 Others Mouse 小鼠 N-Cadherin / CD325 / CDH2 人细胞裂解液 (阳性对照) POPSO,FREEACIDPOPSO生物技术级25G68189-43-5RT

人脑瘤细胞;SF763蓝色葡聚糖 2000 BLUq DqXTRcN FOR GqL FILTRcTION 87912-38-6

FL62891细胞，人肝细胞 小鼠腹水瘤细胞,SAC-II C3细胞 长尾绿猴肾细胞;4647Azithromycin阿齐霉素100毫克14400～116000,液体,7条带

Molt-4(人急性母细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2TRITONX-102曲拉通 X-102试剂级100ML9002-93-1RT

Promocell C-23120 Fibroblast Growth Medium 2KIT, 成纤维细胞生长培养基2型套装 500ml(n-辛基-b-D-硫代毗喃葡萄糖苷)
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
腹泻类8种病毒试剂盒荧光PCR法三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。