艰难梭状芽孢杆菌试剂盒荧光PCR法

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

人支气管平滑肌细胞cDNAHBSMC cDNABOC-L-天冬酰胺质量规格：≥98.5%,BRBoc-Asn-OH

小型猪肾细胞;MPK 畸胎癌细胞，P19细胞 W256细胞，Walker氏癌肉瘤256瘤株Boc-L-谷氨酰胺质量规格：>98.5%,BRBoc-Gln-OH

Sars结构蛋白表达株;293 001ABoc-L-丙氨酸 N-丁二酯质量规格：BRBoc-Ala-OSu

HA Others H5N3 甲型流感 H5N3 (A/duck/Hokkaido/167/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) BOC-D-丙氨酸质量规格：>98.5%,BRBoc-D-Ala-OH

CL-0240V79(仓鼠肺细胞)5×106cells/瓶×2BOC-L-天冬氨酸质量规格：>98.5%,BRBoc-Asp-OH
LOVE1细胞，结直肠癌细胞 人色素瘤细胞,B16细胞 EB病毒转化的人B细胞;HH-29巴马汀氯化物一水合物(分析标准品)Palmatine chloride hydrate质量规格：分析标准品

HCC827(人非小细胞肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2BSA[=N,O-双(基硅基)乙酰胺](>75.0%(GC))N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide质量规格：>75.0%(GC)

ARSA Others Human 人 ARSA / Arylsulfatase A 人细胞裂解液 (阳性对照) BSTFA[=N,O-双(基硅基)三氟代乙酰胺](>95.0%(GC),用于气相色谱)

人肝细胞;HL-7702[L-02]N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide质量规格：>95.0%(GC)

MS4A1 Others Ferret 雪貂 CD20 / MS4A-1 人细胞裂解液 (阳性对照) TMS-咪唑(=N-基硅基咪唑)(>98.0%(T))TMS-Imidazole (=N-Trimethylsilylimidazole)质量规格：>98.0%(T)
SW1990细胞，人胰腺癌细胞 人胸膜瘤细胞,SMC-1细胞 杂交瘤(B类);Z51B3C10H12A12G2F7E74-乙酰氧基它莫西芬质量规格：美国进口4-Acetoxy Tamoxifen

HUVEC(HUV-EC-C) (人脐静脉血管内皮细胞) 5×106cells/瓶×2N-去甲基-4-羟基它莫西芬-d5 (1:1 E/Z 混合物)质量规格：美国进口N-Desmethyl-4-hydroxy Tamoxifen-d5 (1:1 E/Z Mixture)

Promocell C-22022 Endothelial Cell GrowthMedium MV2, 内皮细胞生长培养基MV2(即用型) 500ml(Z)-4-羟基-N-去甲基它莫西芬 (同分)质量规格：美国进口(Z)-4-Hydroxy-N-desmethyl Tamoxifen (mixture of isomers)

人**基质细胞裂解物HHGMCLN-去甲基-4-羟基它莫西芬 (大约1:1 E/Z 混合物)质量规格：美国进口N-Desmethyl-4-hydroxy Tamoxifen (approx. 1:1 E/Z Mixture)

IL17RB Others Human 人 IL17RB / IL-17 Receptor B 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (1R,4R)-N-去甲基盐酸舍曲林质量规格：美国进口(1R,4R)-N-Desmethyl Sertraline
肺成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)DEAE葡聚糖凝胶A-50shēng huà shì jì容量：5KU

MET Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 人细胞裂解液 (阳性对照) 亚油酸 Methyl linoleate,≥99% 112-63-0 1G 通用试剂

艰难梭状芽孢杆菌试剂盒荧光PCR法人成骨肉瘤细胞;MG-63肝速酶I(-20°C) HqPcRINcSq 902-39-

豚鼠心肌细胞;GP-H1 EBV 转化的绒猴白细胞，B95-8细胞 MEL细胞，小鼠红白血病细胞PONCEAUS丽春红S (猩红S)深红色结晶粉末RTsigma

人胚肺成纤维细胞;MRC-5587-84-8二本胺化 98%DIpxenYLAMINE SULFATE