间日疟原虫试剂盒荧光PCR法

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入���无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

人成纤维细胞-RNAHEF-a miRNA5 μg乳酸钙五水(>98%,USP)质量规格：>98%,USPCalcium (L)-lactate, pentahydrate

Hela细胞，细胞 耐DDP肺癌细胞,A549/DDP细胞 H9c2大鼠心肌细胞(ATCC来源)2'-脱氧胸苷-5'-一1酸二钠盐质量规格：>97%,分子生物学级dTMP, 2'-Deoxythymidine-5'-monophosphate di salt

豚鼠心肌细胞;GP-H1卫茅醇(>99%，分子生物学级)质量规格：>99%，分子生物学级Dulcitol

CLMP Others Human 人 ASAM 人细胞裂解液 (阳性对照) 阿尼芬净质量规格：>98%,BRAnidulafungin

CL-0419QSG-7701(人正常肝细胞)5×106cells/瓶×2安丝菌素P-3（束丝放线菌）质量规格：总含量>95% ,进分Ansamitocin P-3
NCI-H460 人大细胞肺癌细胞N,O-双(硅基)乙酰胺(>75.0%(GC))N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide质量规格：>75.0%(GC)

COS-7L, 非洲绿猴肾成纤维细胞巴氯芬(标准品)Baclofen质量规格：HPLC>98%,标准品

人脐带血单个核细胞巴洛沙星(标准品)Balofloxacin Dihydrate质量规格：> 98%,水合物标准品

人胚肾细胞;2V6.11 人胰腺上皮细胞完全培养基 100mL巴洛沙星Balofloxacin Dihydrate质量规格：度> 98.5%,BR,二水合物

人肝细胞;HL-7702[L-02]盐酸苯达莫司汀Bendamustine HCl质量规格：度> 98%
狗肾恶性组织细胞增生症细胞;DH82 胚胎成纤维细胞，3T3-Swiss albino细胞 L6细胞，大鼠骨骼肌成肌细胞4-羟基氨苯蝶啶硫酸钠盐质量规格：美国进口4-Hydroxy Triamterene Sulfate,  Salt

人脐静脉内皮细胞(人膀胱癌细胞污染);ECV-304 [ECV304;ECV 304]2,4-二氨基-6-苯基-7-蝶啶质量规格：美国进口2,4-Diamino-6-phenyl-7-pteridinol

HA Others H4N6 甲型流感 H4N6 (A/mallard/Ohio/657/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 外消旋拉呋替丁质量规格：美国进口rac Lafutidine

人羊膜间充质基质细胞HAMSC罗沙替丁质量规格：美国进口Roxatidine

MME Others Cynomolgus 食蟹猴 CD10 / Neprilysin / MME 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-氯-4'-羟基二苯(>95.0%(GC))质量规格：>95.0%(GC)4-Chloro-4'-hydroxydiphenyl Ether
SIRPA Others Human 人 SIRPA / CD172A 人细胞裂解液 (阳性对照) CRESOLRED,wo7iumSALT红钠盐分析级棕色结晶粉末RTsigma

肺成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)反式油酸 Methyl elaidate,≥99.0% 1937-62-8 1ML 通用试剂

GPR114 间日疟原虫试剂盒荧光PCR法Others Human 人 GPR114 人细胞裂解液 (阳性对照) N-(2-羌基)-N'-(2-磺醋)内盐 HqPqS 7277-39-3

大鼠破骨细胞完全培养基 100mLOCBA邻录50毫升AR，98.5%

AZ-521人胃癌细胞 Human gasic cancer cells AZ-521 MEM+10% FBS6211-24-1二本胺磺酸钡DIpxenYLAMINE-4-SULFONIC ACID BARIUM SALT

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