Q热立克次体试剂盒荧光PCR法

储存条件：
仅��于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

绿色荧光蛋白标记小鼠前胃癌细胞;MFC-GFP促性腺释放相关蛋白（1-13），人Gn-RH Associated Peptide (GAP) (1-13), human质量规格：>95%,BR

HL-7702细胞，人肝细胞正常 人干细胞因子单克隆抗体细胞株,AMS2细胞 叙利亚仓鼠皮肤细胞;GH-S1海沙瑞林Hexarelin质量规格：>95%,BR

LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷细胞) 5×106cells/瓶×2组胺素5Histatin 5质量规格：>95%,BR

Promocell C-20011 Keratinocyte GrowthMedium 2, 角质细胞生长培养基2型(即用型) 500ml高钙血症恶性因子（1-34）酰胺，人Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), amide, human质量规格：>95%,BR

人角膜细胞HK高钙血症恶性因子（1-34）， 人Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), human质量规格：>95%,BR
RA, 大鼠星形胶质细胞L-谷氨酸L-Glutamic acid质量规格：>99%,BR

3T3/e细胞，小鼠成纤维细胞 白介素-2转染耐VP16绒癌细胞,JEG-3/VP16-IL-2细胞 人肾系膜细胞RNAHRMC miRNA5 μgL-延胡索乙素L-Tetrahydropalmatine质量规格：美国进口

恒河猴肺细胞;RM-L1尼可地尔-d4Nicorandil-d4质量规格：美国进口

EPHB4 Others Human 人 EphB4 / HTK 人细胞裂解液 (阳性对照) 尼可地尔N-氧化物Nicorandil N-Oxide质量规格：美国进口

人EB病毒转化的B细胞;CGM16-羟基尼可地尔6-Hydroxy Nicorandil质量规格：美国进口
脑膜细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)AdoMetS-腺甘基蛋酸100克BR，80%

CSNK2A1 Others Human 人 CSNK2A1 / CK2A1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 连本三加醋水合物 1,2,3-Bqnzqnqtriccrboxylic ccid 269-21-7

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞;RAW 264.7 [RAW264.7;异炳基间本; 3-异炳基本; 1-异炳基-3-基本; 1-基-3-异炳基本; 间本异炳烷; 间异炳基本烷; 间聚伞花速;  M-CyMqnq;Isopropyl-M-toluqnq; 1-Mqthyl-3-isopropylbqnzqnq; 3-Isopropyltoluqnq; 1-Isopropyl-3-Mqthylbqnzqnq; Mqthyl-(3-Mqthylqthyl)bqnzqnq; M-CyMol; 232-77-3

CHO/dhFr-细胞，中国仓鼠二氢叶酸还原酶缺陷细胞 人肝癌细胞,HuH-7细胞 CL-0144LoVo(人大肠癌细胞)5×106cells/瓶×22-Thiouracil2-硫尿嘧啶5克3.5N，0.25×50㎜

中国仓鼠肺细胞;V792438-80-4L(-)-岩藻糖L-FUCOSE
CD19 Others Human 人 CD19 / Leu-12 人细胞裂解液 (阳性对照) 变色素2Rshēng huà shì jì容量：100克

Q热立克次体试剂盒荧光PCR法大鼠垂体瘤细胞;GH3阿布拉霉素 Apramycin sulfate,95% 65710-07-8 25G 通用试剂

MME Others Human 人 CD10 / MME / Neprilysin 人细胞裂解液 (阳性对照) 轻溴醋(*);溴轻醋;溴化轻溶液 xy7nogqn BroMidq - Mqthcnol Rqcgqnt;(5-10%) [for qstqrificction];xy7nogqn broMidq 10032-10-6

LAN-6 神经母细胞瘤GLYCINE甘酸生物技术级白色粉末RTsigma

ES-2人卵巢透明细胞癌 ES-2 human ovarian clear cell carcinoma McCOY's 5A+10%FBS544-40-1二丁基硫 96%Dibutyl sulfide