PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
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产品名称
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非洲猪瘟病毒试剂盒荧光PCR法快检
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规格
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50T
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货号
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XG-R63673
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储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)螺[1,3,3-基吲哚苯并二氢吡喃][光致变色化合物](>98.0%(HPLC)(T))质量规格：>98.0%(HPLC)(T)1,3,3-Trimethylindolinobenzopyrylospiran
[Photochromic Compound]
CD46 Others Human 人 CD46 人细胞裂解液 (阳性对照) 1,3,3-基吲哚-奈谔嗪(>98.0%(HPLC)(T))质量规格：>98.0%(HPLC)(T)1,3,3-Trimethylindolinonaphthospirooxazine
[Photochromic Compound]
MAO EBV-转化人细胞3,3-二苯基-3H-萘并[2,1-b]吡喃(>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)3,3-Diphenyl-3H-naphtho[2,1-b]pyran
CM-H018人成纤维细胞完全培养基100mL硫靛红质量规格：Thioindigo
SP2/0, 小鼠骨髓瘤细胞三苯双脒（标准品）质量规格：UV法含量测定tribendimidine
SMPD1 Others Mouse 小鼠 SMPD1 / ASM 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 丹蒽醌（标准品）1,8-Dihydroxyanthraquinone质量规格：含量测定
CM-H030人外周血白细胞完全培养基100mL己定（标准品）Chlorhexidine 质量规格：HPLC法含量测定
MG-63, 人骨肉瘤细胞 肝癌细胞,CBRH-7919细胞 TT(人骨髓样甲状腺癌细胞)盐酸甲氧那明（标准品）Methoxyphenamine
HCl质量规格：含量测定
正常小鼠Sertoli细胞;TM4愈创木酚磺酸钾（标准品）Potassium guaiacolsulfonate
hemihydrate质量规格：供HPLC法含量测定用
CD7 Others Human 人 CD7 人细胞裂解液 (阳性对照) 棓丙酯（标准品）Propyl gallate质量规格：含量测定
CM-R026大鼠骨髓基质细胞完全培养基100mL比布里希猩红shēng huà shì jì容量：50毫克
MKN-45细胞，人低分化胃癌细胞 人神经母细胞瘤细胞,BE(2)C细胞 非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS22-(三拂基)炳1醋 2-(Trifluoromqthyl)ccrylic ccid 381-98-6
CRFK(猫肾细胞) 5×106cells/瓶×2没食子酸一水物shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光25毫克
CA10 Others Human 人 CA10 / CARPX 人细胞裂解液 (阳性对照)
A.C.E.SEQUENCINGBUFFERA.C.E. 测序缓冲液 (1X)测序级透明无色无混浊液体RTsigma
人类成纤维细胞系;CNLMG-B5538SKIN122-62-3癸二酸二(2-乙基己基)酯;癸二酸二异辛酯;皮脂酸二异辛酯Di(2-etxylhexyl)
sebacate;Diisooctyl sebacate;Octoil S;Plexol 201;DOS
EFNA3 Protein Human 重组人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白Papain番木瓜酶25克BR，500u/mg
HO-8910PM(人高转移卵巢癌细胞) 5×106cells/瓶×2 颌下腺上皮细胞Many types of
cells包装：5 × 105方(1ml)5-尿苷三1酸二钠盐 5′-UDP,2Na,98%
285978-18-9 100MG 通用试剂
非洲猪瘟病毒试剂盒荧光PCR法快检间充质干细胞成骨细胞分化培养基MODM每菌培养基 Fungi Mqdium
KLRC1 Others Cynomolgus 食蟹猴 NKG2A / NKG2 / CD159A /
KLRC1 人细胞裂解液 (阳性对照)
Amastatinxy7nochloridehydrate肽酶抑制剂盐酸盐25毫克生物技术级，99%
人肾皮质近曲小管上皮细胞;HK-2高盐察氏培养基NA
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