PCR实��方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
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产品名称
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水泡性口炎病毒试剂盒荧光PCR法
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规格
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50T
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货号
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XG-R63682
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储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
人食道上皮细胞RNAHEEpiC miRNA5 μg头孢妥仑匹酯质量规格：>950μg/mg,BRCefditoren
pivoxil
兔间变表皮鳞癌瘤株;VX2 前列腺癌细胞，22RV1细胞 MDCK superdome细胞，狗肾细胞隆突型头孢妥仑匹酯(标准品)质量规格：效价测定Cefditoren
pivoxil
人永生化细胞;CNLMG-B5537LC吡嗪酰胺质量规格：>99%,USPPyrazinamide
HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 血凝素HA1
(Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) 阿魏酸,柏酸,反式阿魏酸质量规格：>99%,合成Ferulic acid
CL-0428RM1(大鼠肌肉成纤维样细胞)5×106cells/瓶×2阿魏酸(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Ferulic acid
SW620(人结肠癌细胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H7N9
(A/Shanghai/4664T/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸甲氧那明Methoxyphenamine
HCl质量规格：>98.5%,CP
人肺泡上皮细胞HPAEpiC安息香甲基(>98.0%(GC))Benzoin
Methyl Ether质量规格：>98.0%(GC)
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Texas/05/2009) HA 人细胞裂解液 (阳性对照) 安息香异丁基(>95.0%(GC))Benzoin
Isobutyl Ether质量规格：>95.0%(GC)
KM9304 EBV-转化人细胞(彝族)2,2-二乙氧基苯乙酮(>95.0%(GC))2,2-Diethoxyacetophenone质量规格：>95.0%(GC)
CM-H099人上皮细胞完全培养基100mL2,2-二甲氧基-2-乙酮(>98.0%(GC))2,2-Dimethoxy-2-phenylacetophenone质量规格：>98.0%(GC)
Neuro-2a细胞，小鼠脑神经瘤细胞 MDA-MB-231(癌细胞) 人脑瘤细胞;SF7674-叔丁基杯[5]芳烃(>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)4-tert-Butylcalix[5]arene
IL8 Protein Human 重组人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 6-77, Fc 标签)杯[8]芳烃(>90.0%(HPLC))质量规格：>90.0%(HPLC)Calix[8]arene
SP2/0(小鼠骨髓瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 AXR2 / CMG2 人细胞裂解液 (阳性对照) 杯[6]芳烃(>95.0%(HPLC))质量规格：>95.0%(HPLC)Calix[6]arene
人羊膜细胞;HA4-叔丁基杯[6]芳烃(含5-10%的苯)(>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)4-tert-Butylcalix[6]arene
(contains 5-10% Benzene)
NA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 神经氨酸酶 (Neuraminidase /
NA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-叔丁基-1-(乙氧羰基甲氧基)硫杂杯[4]芳烃(>94.0%(HPLC))质量规格：>94.0%(HPLC)4-tert-Butyl-1-(ethoxycarbonylmethoxy)thiacalix[4]arene
视网膜神经节细胞Many types of
cells包装：5 × 105方(1ml)麦芽浸出粉100克
斑马鱼尾鳍细胞;AB.9 人肝癌细胞，SNU-182细胞 HEp-2(喉表皮样癌细胞)皇区每读速 G2(+4℃) cFLcTOXIN G2
741-98-7
人脑瘤细胞;SF126N-2--N'-... HEPES (≥99.5%) 7365-45-9 25G 通用试剂
水泡性口炎病毒试剂盒荧光PCR法TLR3 Others Mouse 小鼠 TLR3 / CD283 人细胞裂解液 (阳性对照)
DFSDNAPOLYMERASE500UDFS-TAQ DNA 聚合酶500 UnitsFrozen
非洲绿猴肾细胞;VERO(过铵)
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