羊种特异性基因试剂盒荧光PCR法

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

人60S核糖体蛋白L17(RPL17)试剂盒 Human RPL17 ELISA kit 马来酸二丁酯(standard for GC,≥99.5%(GC))  Dibutyl maleate  质量规格：standard for GC,≥99.5%(GC)

人60S核糖体蛋白L36a-样(RPL36AL)试剂盒 Human RPL36AL ELISA kit 二甲基亚砜(Standard for GC,≥99.95%(GC)

人8异前列腺素(8-iso-PG)试剂盒 Human 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit 丙位庚内酯(Standard for GC ,>98.5%(GC))  γ-Heptalactone  质量规格：Standard for GC ,>98.5%(GC)GC,≥99.9%(GC) 人8-异构前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)试剂盒 Human 8-epi-prostaglandin F2alpha,8-epi-PGF2α ELISA Kit

丙位庚内酯(Standard for GC ,>98.5%(GC))  γ-Heptalactone  质量规格：Standard for GC ,>98.5%(GC) 人8异前列腺素(8-iso-PG)试剂盒 Human 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit

(+)-葑酮(standard for GC, ≥99.5% (GC))  (+)-Fenchone  质量规格：standard for GC, ≥99.5% (GC) 人8异前列腺素F2α(8-iso-PGF2a)试剂盒 Human 8-iso prostaglandin F2α,8-iso-PGF2a ELISA Kit
人雌受体β(ESR2)试剂盒 Human Esogen receptor beta,ESR2 ELISA kit 橙黄G；酸性橙10  Orange G  质量规格：BS

Ratsolubleierleukin-2receptor,IL-2sRβELISAKit大鼠白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)ELISA试剂盒规格：96T/48T 橙黄Ⅱ  OrangeⅡ  质量规格：AR

IKB-ALPHA蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25 柯衣定  Chrysoidin  质量规格：AR

Mouseβ-hexosaminidaseA,β-HexAELISA试剂盒小鼠β氨基己糖苷酶A(β-HexA)ELISA试剂盒规格：96T/48T 日落黄  Sunset Yellow FCF  质量规格：BS

小鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA试剂盒 ，英文名： bFGF ELISA Kit 酒石黄；柠檬黄；酸性黄 23  Tartrazine  质量规格：BS

大鼠内皮型合成酶(eNOS)ELISA检测试剂盒RatEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit 96T/48T 酸性黄17  Acid Yellow 17  质量规格：AR

人雌硫酸转移酶(SULT1E1)试剂盒 Human SULT1E1 ELISA Kit 5-TAMRA；5-羧基四甲基罗丹明琥珀脂  5-TAMRA, SE  质量规格：>90%

Ratsolubleplateletendothelialcelladhesionmolecule1,sPECAM-1ELISAKit大鼠可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA试剂盒规格：96T/48T 吉拉尔特试剂T  Girard’s reagent T  质量规格：0.98

IKB-ALPHA蛋白共沉淀分析试剂盒5 钽试剂  N-Benzoyl-N-phenylhydroxylamine  质量规格：AR

Mouseβ-Lactamaseinhibitors,BLIELISA试剂盒小鼠β内酰胺酶抑制剂(BLI)ELISA试剂盒规格：96T/48T 左西孟旦  Levosimendan  质量规格：>99%,BR
人抗SS-A/Ro抗体试剂盒 Human SS-A/Ro aibody ELISA kit 二氢青蒿酸 HPLC≥98% 20mg

人抗SSB/La抗体试剂盒 Human ai-SSB/La aibody ELISA Kit 二氢欧山芹素 HPLC≥98% 20mg

人抗SS-B/La抗体试剂盒 Human SS-B/La Aibody,ELISA Kit 二氢欧山芹素 (标准品)  Columbianetin   质量规格：HPLC≥98%，标准品

人抗TNF-α自身抗体试剂盒 Human ai-TNF-alpha aoaibody ELISA kit 二氢欧山芹醇当归酸酯（标准品）  Columbianadin  质量规格：HPLC≥98%，标准品

人抗U1小核核糖核蛋白70kDa(SNP70)抗体试剂盒 Human ai U1 small nuclear ribonucleoprotein 70kDa(SNP70)aibody ELISA kit 二氢欧山芹醇当归酸酯 HPLC≥98% 20mg

人抗UACA抗体(IgG)试剂盒 Human ai-UACA aibody IgG ELISA Kit 二氢欧山芹醇醋酸酯 HPLC≥98% 20mg

人抗α-胞衬蛋白抗体(IgG)试剂盒 Human ai-alpha-Fodrin aibody IgG ELISA Kit 二氢尼洛替星 HPLC≥98% 5mg

人抗α干扰素抗体(IFNα-Ab)试剂盒 Human IerferonαAibody,IFNα-Ab ELISA Kit 二氢酮酸甲酯(植物级)  Methyl dihydrojasmonate  质量规格：>90%,植物级

人抗β2糖蛋白I(β2-GPI)抗体(IgG)试剂盒 Human β2-glycoprotein I(β2-GPI)aibody IgG ELISA kit 二氢猕猴桃内酯,奇异果内酯(标准品)  (2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone  质量规格：HPLC>98%,标准品

人抗β2糖蛋白I(β2-GPI)抗体(IgM)试剂盒 Human β2-glycoprotein I(β2-GPI)aibody IgM ELISA kit 二氢猕猴桃内酯,奇异果内酯  (2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone  质量规格：>99%,AR
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
羊种特异性基因试剂盒荧光PCR法三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。