鸡种特异性基因试剂盒荧光PCR法

产品特点: 本��品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
人α-烯醇化酶(ENO1/ENO1L1/MBPB1/MPB1)试剂盒 Human ENO1 ELISA kit 精喹禾灵(分析标准品，98%)  Quizalofop-p-ethyl  质量规格：分析标准品，98%

人α烯醇化酶(α-enolase)ELISA检测试剂盒Humanα-enolase 96T/48T 二甲戊乐灵(分析标准品,99%)  Pendimethaline  质量规格：分析标准品,99%

人β,β胡萝卜素9',10'加氧酶(BCO2)试剂盒 Human BCO2 ELISA Kit 氯菊酯(标准品)  Permethrin (isomers) solution  质量规格：分析标准品

人β1,4-N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(B4GAL2)试剂盒 Human B4GAL2 ELISA Kit 残杀威标准溶液(100μg/ml,u=2%)   Propoxur solution  质量规格：100μg/ml,u=2%

人β1能受体(β1AR)抗体试剂盒 Human β1AR aoaibody ELISA Kit 草甘膦(分析标准品,99.5%)  N-(Phosphonomethyl)glycine  质量规格：分析标准品,99.5%

人β2糖蛋白(β2-GP)ELISA检测试剂盒Humanbeta2glycoprotein,β2-GP 96T/48T 草甘膦标准溶液(100μg/ml,u=2%)  N-(Phosphonomethyl)glycine solution  质量规格：100μg/ml,u=2%

人β2糖蛋白(β2-GP)试剂盒 Human beta2 glycoprotein,β2-GP ELISA Kit 草甘膦标准溶液(10μg/ml,u=2%)  N-(Phosphonomethyl)glycine solution  质量规格：10μg/ml,u=2%

人β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 Ab IgA)试剂盒 Human β2-Glycoprotein 1 aibody IgA,β2-GP1 Ab IgA ELISA Kit 辛硫磷(分析标准品,99%)  Phoxim  质量规格：分析标准品,99%

草甘膦标准溶液(100μg/ml,u=2%)  N-(Phosphonomethyl)glycine solution  质量规格：100μg/ml,u=2% 人β2糖蛋白(β2-GP)ELISA检测试剂盒Humanbeta2glycoprotein,β2-GPELISAKit 96T/48T

草甘膦标准溶液(10μg/ml,u=2%)  N-(Phosphonomethyl)glycine solution  质量规格：10μg/ml,u=2% 人β2糖蛋白(β2-GP)试剂盒 Human beta2 glycoprotein,β2-GP ELISA Kit

辛硫磷(分析标准品,99%)  Phoxim  质量规格：分析标准品,99% 人β2糖蛋白1抗体IgA(β2-GP1 Ab IgA)试剂盒 Human β2-Glycoprotein 1 aibody IgA,β2-GP1 Ab IgA ELISA Kit

除草醚标准溶液(10μg/ml,u=5%)  Nitrofen solution  质量规格：10μg/ml,u=5% 人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)试剂盒 human β2-MG ELISA Kit

2-萘氧乙酸(标准品)  2-Naphthoxyacetic acid  质量规格：分析标准品 人β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)试剂盒 Human iegrin β2 ELISA Kit

丹标准溶液(100μg/ml,u=2%)  N-(Trichloromethylthio)phthalimide solution  质量规格：100μg/ml,u=2% 人β2转铁蛋白(β2TF)试剂盒 Human beta 2 ansferrin,β2TF ELISA Kit
小鼠碱性成纤维细胞生长因子9(FGF9)ELISA试剂盒 ，英文名： FGF9 ELISA Kit 甲基蓝  Methyl blue  质量规格：AR

鸡种特异性基因试剂盒荧光PCR法鸡补体3裂解产物(C3SP)ELISA检测试剂盒ChickenCompleme3splitproduct,C3SPELISAKit 96T/48T 伊文思蓝；埃文斯蓝  Evans Blue  质量规格：BS,进分BIOFER,>85%

规格：IND

Rat soluble P selectin (sP-selectin) ELISA Kit 大鼠可溶性P选择素(sP-selectin)ELISA试剂盒 固蓝B  Fast Blue B Salt  质量规格：BS

Humanneuronalapoptosisinhibitoryprotein,NAIPELISAKit 人神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 阿利新蓝8GX  Alcian blue 8GX  质量规格：BS级,干品含量>50%

Humanai-Endostatinaibody,ES-AbELISA试剂盒人血管内皮抑素抗体(ES-Ab)ELISA试剂盒规格：96T/48T 四氮唑蓝；BT  Blue tetrazolium  质量规格：BS
人抗BB抗体(BB-Ab)试剂盒 Human ai-B burgdorleri aibody,BB-Ab ELISA Kit 二去甲基佐米曲坦  Didesmethyl Zolmitriptan  质量规格：美国进口

人抗BP180抗体(ai-BP180-Ab)试剂盒 Human ai-BP180-Ab ELISA Kit 二去甲基米非司酮  Didemethyl Mifepristone 格：HPLC≥98%，BR

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

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