兔种特异性基因试剂盒荧光PCR法

储存条件：
仅用��科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

Cy2标记二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升 二氢两面针碱 HPLC≥98% 20mg

Cy3标记二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升 二氢麻醉椒苫素 HPLC≥98% 10mg

CY3蛋白标记试剂盒3(200微克/) 二氢欧山芹醇醋酸酯 HPLC≥98% 20mg

Cy5标记二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升 二氢欧山芹醇当归酸酯 HPLC≥98% 20mg

CY5蛋白标记试剂盒3(200微克/) 二氢欧山芹素 HPLC≥98% 20mg

CYP1A2蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25 二氢石蒜碱 HPLC≥98% 20mg

兔种特异性基因试剂盒荧光PCR法Ratsolubleierleukin-1receptorⅡ,IL-1sRⅡELISAKit大鼠白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA试剂盒规格：96T/48T 荧光桃红B,酸性红92  Phloxine B  质量规格：AR

IGF蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25 依莱铬红B  Eriochrome Red B  质量规格：AR

Mouseβ-glucosidaseELISA试剂盒小鼠β葡糖苷酶(β-glucosidase)ELISA试剂盒规格：96T/48T 固红RL  Fast Red RL Salt  质量规格：>90%,BR

小鼠腱蛋白样蛋白2(CHRDL2)ELISA试剂盒 ，英文名： CHRDL2 ELISA Kit 固红紫色LB盐  Fast Red Violet LB Salt  质量规格：>95%,BR

人核糖核酸(Irna)ELISA检测试剂盒HumanImmuneRNA,IrnaELISAKit 96T/48T 苋菜红  Amaranth  质量规格：BS

大鼠血管活性肠肽(VIP)试剂盒 Rat Vasoactive Iestinal Peptide,VIP ELISA Kit 丽春红4R,新胭脂红,亮丽春红5R,酸性红18  Brilliant ponceau 5R  质量规格：BS

英文名称RatacetylcholineELISAKit大鼠乙酰胆碱(Ach)ELISA试剂盒规格：96T/48T 酚藏花红  Phenosafranine  质量规格：>80%
人紧密连接蛋白1(ZO1)试剂盒 Human tight junction protein 1,ZO1 ELISA Kit 二硝基水杨酸  3,5-Dinitrosalicylic acid  质量规格：>98%,BR

人精氨酸(Arg)试剂盒 Human Arginine,Arg ELISA kit 二萜酸甲酯 HPLC≥98% 5mg

人精氨酸加压素(AVP)ELISA检测试剂盒Humanargininevasopressin,AVPELISAKit 96T/48T 二水合土霉素  Oxytetracycline Dihydrate  质量规格：美国进口

人精氨酸酶(Arg)ELISA检测试剂盒HumanArginase,ArgELISAKit 96T/48T 二十一烷(>99.0%(GC)，标准物质)  Heneicosane  质量规格：>99.0%(GC)，标准物质

人精氨酸酶2(ARG2)试剂盒 Human ARG2 ELISA Kit 二十五烷(分析标准品,>99%(GC))  Pentacosane  质量规格：分析标准品,>99%(GC)

人精氨酸脱羧酶(ADC)试剂盒 Human Arginine Decarboxylase,ADC ELISA Kit 二十五烷(>99.0%(GC)，标准物质)  Pentacosane  质量规格：>99.0%(GC)，标准物质

人精氨酰-NA合成酶(RARS)试剂盒 Human Arginyl-NA Syhetase,RARS ELISA Kit 二十五烷  GC≥99% 250mg

人精胺合成酶(SRM)试剂盒 Human spermidine syhase,SRM ELISA kit 二十五碳酸  HPLC≥98% 100mg

人精脒/精胺N(1)-乙酰转移酶样蛋白1(SATL1)试剂盒 Human SATL1 ELISA Kit 二十烷(分析标准品,≥99.5%(GC))  Eicosane  质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC)

人巨泌乳素试剂盒 Human Macroprolactin ELISA Kit 二十烷(>99.5%(GC),标准物)  Eicosane  质量规格：>99.5%(GC),标准物质

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