貉种特异性基因试剂盒荧光PCR法

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
人β-微精原蛋白(MSMB/PRSP)试剂盒 Human MSMB/PRSP ELISA kit O-(2,3,4,5,6-五氟苄基)羟胺盐酸盐(>98.0%(HPLC)(N))  O-(2,3,4,5,6-Pentafluorobenzyl)hydroxylamine   质量规格：>98.0%(HPLC)(N)

人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)试剂盒 Human β-site APP-Cleaving Enzyme 1,BACE1 ELISA kit 壬烷(>99.5%(GC),标准物)  Nonane  质量规格：>99.5%(GC),标准物质

人β位淀粉样前体蛋白裂解酶2(BACE2)试剂盒 Human beta-site APP-cleaving enzyme 2,BACE2 ELISA Kit 二十烷(>99.5%(GC),标准物)  Eicosane  质量规格：>99.5%(GC),标准物质

人β细胞素(BTC)试剂盒 Human beta cellulin,BTC ELISA Kit 二十一烷(>99.0%(GC)，标准物质)  Heneicosane  质量规格：>99.0%(GC)，标准物质

人β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)试剂盒 Human β-Thromboglobulin,β-TG ELISA Kit 二十二烷(>99.0%(GC)，标准物质)  Docosane   质量规格：>99.0%(GC)，标准物质

人β抑制蛋白2(ARRB2)试剂盒 human ARRB2 ELISA Kit 二十三烷(>99.0%(GC)，标准物质)  Tricosane  质量规格：>99.0%(GC)，标准物质

人β-转导素重复序列包含蛋白(BC)试剂盒 Human BC ELISA Kit 二十四烷(>99.0%(GC)，标准物质)  Tetracosane  质量规格：>99.0%(GC)，标准物质

人γ氨基(GABA)ELISA检测试剂盒HumanGamma-aminobyricacid,GABA 96T/48T 二十五烷(>99.0%(GC)，标准物二十四烷(>99.0%(GC)，标准物质)  Tetracosane  质量规格：>99.0%(GC)，标准物质 人β-转导素重复序列包含蛋白(BC)试剂盒 Human BC ELISA Kit

二十五烷(>99.0%(GC)，标准物质)  Pentacosane  质量规格：>99.0%(GC)，标准物质 人γ氨基(GABA)ELISA检测试剂盒HumanGamma-aminobyricacid,GABAELISAKit 96T/48T

正辛酸甲酯(>99.5%(GC),标准物质)  Methyl n-Octanoate  质量规格：>99.5%(GC),标准物质 人γ氨基(GABA)试剂盒 Human Gamma-aminobyric acid,GABA ELISA Kit

壬酸甲酯(>99.5%(GC),标准物质)  Methyl Nonanoate   质量规格：>99.5%(GC),标准物质 人γ分泌酶试剂盒 Human γ-Secretase ELISA kit

甲酯(>99.5%(GC),标准物质)  Methyl Laurate   质量规格：>99.5%(GC),标准物质 人γ分泌素激活蛋白(PION)试剂盒 Human PION ELISA Kit

肉豆蔻酸甲酯(>99.5%(GC),标准物质)  Methyl Myristate  质量规格：>99.5%(GC),标准物质 人γ干扰素(IFN-γ)抗体试剂盒 Human IFN-γ aibody ELISA kit
HSV2(HERPESSIMPLX2)病毒标准曲线定量PCR扩增检测试剂盒2 BOC-L-酪氨酸甲酯  Boc-Tyr-OMe  质量规格：>99%,BR

Mouseβmannosidase,βManaseELISA试剂盒小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISA试剂盒规格：96T/48T N-叔丁氧羰基-O-(2-苄氧羰基)-L-酪氨酸  Boc-O-(2-bromo-Cbz)-L-Tyrosine  质量规格：>98%,BR

小鼠胶原酶I(Collagenase I)ELISA试剂盒 ，英文名： Collagenase I ELISA Kit Boc-O-叔丁基-L-酪氨酸  Boc-O-tert-butyl-L-tyrosine  质量规格：>98%,BR

大鼠细胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA检测试剂盒RatCyclin-D3ELISAKit 96T/48T BOC-D-缬氨酸  Boc-D-Val-OH  质量规格：>98%,BR

人促甲状腺素(TSH)试剂盒 Human Thyroid Stimulating Hormone,TSH ELISA Kit BOC-L-苯甘氨酸  Boc-Phg-OH  质量规格：0.98

RatSolubleIercellularAdhesionMolecule1,sICAM-1ELISAKit大鼠可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T BOC-L-高苯丙氨酸  BOC-L-Homophenylalanine  质量规格：>98%,BR

HSV病毒DNA化试剂盒20 BOC-D-丝氨酸甲酯  BOC-D-Serine methyl ester  质量规格：>98%,BR

Mouseβ2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M,β2-GP1IgA/G/MELISA试剂盒小鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1IgA/G/M)ELISA试剂盒规格：96T/48T BOC 精氨酸  Boc-Arg(Pbf)-OH  质量规格：0.98

小鼠胶原酶Ⅲ(Collagenase Ⅲ)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Fmoc-L-丙氨酸  Fmoc-Ala-OH  质量规格：>98%,BR

Rat granzyme A (Gzms-A) ELISA Kit 大鼠颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒 Fmoc-L-苯丙氨酸  Fmoc-Phe-OH  质量规格：0.98
TSPAN1 Others Human 人 TSPAN1 (aa 110-211) 人细胞裂解液 (阳性对照) 茜素25克

脑静脉血管内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)4-基苯硼酸 4-Vinylphenylboronic acid 2156-4-9 1G 通用试剂

H-4-II-E细胞，大鼠肝细胞瘤 人卵巢癌细胞,Caov-3细胞 人髓核细胞裂解物HNPCLL-刀豆安醋(2-8°C) L-cLPHc-cMINO-GcMMc-[GUcNIDINOOXY]-N-BUTYRIC cCID 243-38-4

非洲绿猴肾细胞;VERO E6葡聚糖凝胶S-200HR250U

IFNB1 Others Human 人 Ierferon beta / IFN-beta / IFNB 人细胞裂解液 (阳性对照) 铵Ammonium, Quant Test Strips
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1貉种特异性基因试剂盒荧光PCR法循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。