鸡马立克病毒(MDV)试剂盒荧光-PCR法

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

火炬松(loblollypine)培养基500毫升溶液/片剂 第威德合金  Devarda's alloy  质量规格：工业级

霍乱弧菌(Vibriocholerae)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20 二乙酰一肟(>98%，BR)  Diacetyl monoxime  质量规格：>98%，BR

肌动蛋白聚合作用(polymerization)检测试剂盒20 马来酸二乙酯(>98%，BR)  Diethyl maleate  质量规格：>98%，BR

鸡1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA检测试剂盒Chicken1,3-βDglucosidase 96T/48T 二氢细胞松弛素(>98%，BR)  Dihydrocytochalasin B  质量规格：>98%，BR

鸡17-酮类(17-KS)ELISA检测试剂盒Chicken17-ketosteroids,17-KS 96T/48T 二异辛胺(>98%，BR)  Diisooctylamine  质量规格：>98%，BR

鸡5核苷酸酶(5-)ELISA检测试剂盒Chicken5-Nucleotidase,5- 96T/48T 马来酸二甲酯(>98%，BR)  Dimethyl maleate  质量规格：>98%，BR

鸡B因子(BF)ELISA检测试剂盒ChickenfactorB,BF 96T/48T 丁二酸二甲酯(>99%,BR)  Dimethyl succinate  质量规格：>99%,BR

鸡C反应蛋白(CRP)ELISA检测试剂盒ChickenC-ReactiveProtein,CRP 96T/48T 二甲基甲酮钠盐(>97%,BR)  Dimethylglyoxime  salt  质量规格：>97%,BR

鸡L苯氨酸解氨酶(PAL)ELISA检测试剂盒ChickenL-Phenylalanineammonla-lyase,PAL 96T/48T 直接蓝71(≥50%,BR)  Direct blue 71  质量规格：≥50%,BR

鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA检测试剂盒ChickenN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG 96T/48T 天狼猩红  Direct red 80  质量规格：BS
二乙酰一肟(>98%，BR)  Diacetyl monoxime  质量规格：>98%，BR 霍乱弧菌(Vibriocholerae)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20

马来酸二乙酯(>98%，BR)  Diethyl maleate  质量规格：>98%，BR 肌动蛋白聚合作用(polymerization)检测试剂盒20

二氢细胞松弛素(>98%，BR)  Dihydrocytochalasin B  质量规格：>98%，BR 鸡1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA检测试剂盒Chicken1,3-βDglucosidaseELISAKit 96T/48T

二异辛胺(>98%，BR)  Diisooctylamine  质量规格：>98%，BR 鸡17-酮类(17-KS)ELISA检测试剂盒Chicken17-ketosteroids,17-KSELISAKit 96T/48T

马来酸二甲酯(>98%，BR)  Dimethyl maleate  质量规格：>98%，BR 鸡5核苷酸酶(5-)ELISA检测试剂盒Humanα2macroglobulin,α2MGELISAKit人α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA试剂盒规格：96T/48T BOC-L-脯氨酸  Boc-Pro-OH  质量规格：>98.5%,BR

小鼠角蛋白9(K9)ELISA试剂盒 ，英文名： K9 ELISA Kit BOC-L-色氨酸  Boc-Trp-OH  质量规格：>98.5%,BR

人β萘酚(β-naphthol)ELISA检测试剂盒HumanBeta-naphtholELISAKit 96T/48T BOC-L-天冬氨酸  Boc-Asp-OH  质量规格：>98.5%,BR

大鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)试剂盒 Rat angiotension Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISA Kit BOC-L-谷氨酸  Boc-L-Glutamic acid  质量规格：>98.5%,BR

英文名称RatacetylcholinereceptoraibodyELISAKit大鼠乙酰胆碱受体抗体(AChRab)规格：96T/48T BOC-L-亮氨酸  Boc-Leu-OH  质量规格：>98.5%,BR

谷氨酰胺脱羧酶 N-叔丁氧羰基-L-甲硫氨酸  BOC-L-Mine  质量规格：>98%,BR

ELISAKitACH人乙酰胆碱规格：48T/96T BOC-L-丝氨酸  N-(tert-Butoxycarbonyl)-L-serine  质量规格：>99%,BR

小鼠角蛋白18(K18)ELISA试剂盒 ，英文名： K18 ELISA Kit BOC-L-缬氨酸  Boc-Val-OH  质量规格：>99%,BR

人β葡糖苷酶(β-glucosidase)ELISA检测试剂盒Humanβ-glucosidaseELISAKit 96T/48T BOC-L-天冬酰胺  Boc-Asn-OH  质量规格：≥98.5%,BR
HEC-1-B细胞，人内膜腺癌细胞 大鼠脑膜细胞,RMC细胞 胰腺癌组织源性原代细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)/1mlZ-DEVD-pNAZ-DEVD-pNA 50MGDRY ICE-F

H22(小鼠肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2玫瑰红6G Bcsic Rqd 1 989-38-8

HWP visceral Pellet 人类内脏白前脂肪细胞团块 > 1 mio.cells 人微血管内皮细胞总RNAHDMEC NAMOLWTMARKER,DNALOWRANGEI-DRYICDNA Marker生物技术级100 gFrozen

T-109B弹性蛋白酶(含100mL酶解缓冲液)10mL盐酸-L-白酰-2-奈胺100克

F7 Others Mouse 小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 CHO细胞裂解液 (阳性对照) Percoll 100ml/1L 原装 Pharmacia17089101
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
鸡马立克病毒(MDV)试剂盒荧光-PCR法二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一���是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

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