储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内**的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
产品名称
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马流感病毒(EIV)试剂盒荧光-PCR法
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规格
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50T
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货号
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XG-R63945
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产品特点: 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断
灵敏度高:可检测个位拷贝数的基因
特异性高:有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高:复孔间差异小,实验结果重复性强
扩增性能优:扩增效率高,荧光信号强
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤高压。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-1醋酸辛酯(标准品)Octyl acetate质量规格:HPLC≥98%,标准品
EPHB4 Others Human 人 EphB4 / HTK 人细胞裂解液 (阳性对照) 大车前苷(标准品)Plantamajoside质量规格:HPLC≥98%,标准品
人结直肠腺癌细胞;Caco-2大豆苷,黄豆苷 (标准品)Daidzin质量规格:HPLC≥98%,标准品
USP46 Others Human 人 USP46 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 大黄酚(标准品)Chrysophanol质量规格:HPLC≥98%,标准品
人间充质干细胞-肝大黄素Emodin质量规格:≥97%,BR
脑成纤维细胞Many types of
cells包装:5 × 105方(1ml)头孢替坦Cefotetan acid 质量规格:Potency>960
mg,JP
PILRA Others Human 人 PILR-alpha / PILRA 人细胞裂解液 (阳性对照) AZD8055AZD-8055 质量规格:>98%,ATP竞争性的mTOR抑制剂
小鼠骨髓瘤细胞;Fox-NYAlectinib;CH5424802CH5424802 质量规格:>98%,ALK抑制剂
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-163 瘤细胞,YAC-1细胞 RSMC细胞,大鼠主动脉平滑肌细胞对甲氧基肉桂酸p-Methoxycinnamic
acid 质量规格:AR,99%
人肺细胞;HLF-a5-羟基色胺盐酸盐,血清胺盐酸盐Serotonin (5-HT)质量规格:>97%,BR
人脑瘤细胞;SF17对本基酚,英文名或英文缩写:4-xy7noxybipxenyl,级别:CP,95%,规格:500克
杂交瘤(B类);Z1510A2G6A2C7 急性母细胞白血病细胞,MOLT-4细胞 H9c2(2-1)细胞,大鼠心肌细胞二醋6-羧基荧光速(-20℃)
6-CcRBOXYFLUORqSCqIN DIcCqTcTq3348-3-6
C6, 大鼠脑胶质瘤细胞 Rattus6,6-二甲基-2-亚甲基-二环[3.1.1]-庚烷,英文名或英文缩写:β-Pinen,级别:BR,规格:25克
CD97 Others Human 人 CD97 人细胞裂解液 (阳性对照) 百里酚酞
尿道上皮细胞培养基UCM(2-羟基磺酸))
SAC-II C3细胞,小鼠腹水瘤细胞 NRK(大鼠肾细胞) 人胚胎膀胱组织来源细胞;CCC-HB-2葡聚糖凝胶S-100HRshēng huà shì jì容量:100U
马流感病毒(EIV)试剂盒荧光-PCR法CCL1 Protein Mouse 重组小鼠 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 (Fc 标签)哌拉西林钠 Piperacillin salt,≥99% 59703-84-3 1G 通用试剂
RF/6A(猴视网膜血管内皮细胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H10N3
(A/mallard/Minnesota/Sg-00194/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) SIM培养基 xy7nogqn Sulfidq
Indolq Motility Mqdium
化大家鼠肺成纤维细胞;NRmVitaminAacetate醋酸维生素A1克IND
人心脏微血管内皮细胞 (HCMEC)( 5×105 )123-25-1丁二酸二乙酯Dietxyl succinate
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