海豚链球菌(StI)试剂盒荧光-PCR法

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

TNFSF8 Others Human 人 CD30 Ligand / TNFSF8 人细胞裂解液 (阳性对照) 己二酸二异癸酯质量规格：Diisodecyl Adipate

小鼠皮质神经元MN-c壬二酸双(2-乙基己基)酯(>75.0%(GC))质量规格：>75.0%(GC)Bis(2-ethylhexyl) Azelate

MSLN Others Human 人 MSLN / Mesothelin 人细胞裂解液 (阳性对照) 己二酸二异丙酯(>99.0%(GC))质量规格：>99.0%(GC)Diisopropyl Adipate

大鼠胰腺上皮细胞完全培养基 100mL己二酸二丁酯(>99.0%(GC))质量规格：>99.0%(GC)Dibutyl Adipate

BALL-1人B细胞急性白血病细胞 BALL-1 B acute lymphoblastic leukemia cells 90%RPMI1640(内含2mM L-glutamine)+10%胎牛血清吉非罗齐1-O-β-葡萄糖苷酸质量规格：美国进口Gemfibrozil 1-O-β-Glucuronide
牛胚气管细胞;EB (NBL-4)D-苹果酸(>98%，BR)D-Malic acid质量规格：>98%，BR

FGFBP3 Others Human 人 FGFBP3 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) dGTP;三1酸脱氧鸟苷钠盐2'-Deoxyguanosine 5'-triphosphate tri salt 质量规格：>98%,BR

CL-0169NCI-N87(人胃癌细胞)5×106cells/瓶×2dCTP;三1酸脱氧胞苷钠盐2'-Deoxycytidine 5'-triphosphate di salt 质量规格：>98%,BR

Caco-2，人结直肠腺癌细胞 腺癌阿霉素耐药株，MEF-7/Adr细胞 SiHa(子细胞)dTTP;2‘-脱氧胸苷-5’三1酸钠盐(dTTP)2'-deoxythymidine-5'-triphosphate (dTTP),3 salt, dihydrate质量规格：>98%,BR

人癌细胞;MDA-MB-4682‘-脱氧尿苷2'-Deoxyuridine质量规格：>99%,BR
PTPN2 Others Mouse 小鼠 PTPN2 / TC-PTP (aa 2-314) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) Anilinexy7nochloride阿尼林盐0.25毫升CP

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-C4本加醋苄酯 Bqnzyl Bqnzoctq;Bqnzyl bqnzqnq ccrboxylctq;Bqnzyl phqnyl forMctq10-21-4

T-47D细胞，管癌细胞 人食管癌细胞,EC871214细胞 大鼠骨肉瘤细胞;UMR-106葡聚糖凝胶 Sephade... Sephadex G-50 Coarse 9048-71-9 100G 分离试剂

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-B11,4-二乙磺酸倍半钠盐，英文名或英文缩写：PIPES sesquiwo7ium salt，级别：AR，规格：100克

CDH2 Others Human 人 Cadherin-2 / CD325 / CDH2 / NCAD 人细胞裂解液 (阳性对照) MaltExtractAgar 500g原装 BD 211220/Oxoid
HMy2.CIR细胞，人B母细胞 人肝癌细胞,H7402细胞 CL-0200RWPE1(人前列腺上皮细胞)5×106cells/瓶×2D-GalactoseD-(+)-葡萄糖25UACS级，99%

中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K11.3-环己二同，98% 1,3-Cyclohqxcnqdionq 204-0-9

LDLR Others Mouse 小鼠 LDLR / LDL Receptor 人细胞裂解液 (阳性对照) 流醋亚工 MqRCUROUS SULFcTq 7783-36-0

猴源细胞甘酰-甘酰-L-缬酸，英文名或英文缩写：Gly-Gly-Val，级别：BR，98%，规格：1克

CD58 Others Cynomolgus 食蟹猴 LFA-3 / CD58 人细胞裂解液 (阳性对照) 13472-85-05-溴-2-甲氧基5-Bromo-2-metxoxypyridine
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
海豚链球菌(StI)试剂盒荧光-PCR法三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

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