幽门螺旋杆菌(HP)试剂盒荧光-PCR法

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
74805-90-6甲基麦冬高黄酮A品牌  methylophiopogononeA   组织1酸二酯酶5(PDE5)活性酶连续循环定1比色法定量检测试剂盒20

7437-55-08-香叶草氧基补骨脂素厂家  8-Geranyloxypsoralen    组织1酸二酯酶4(PDE4)活性荧光定量检测试剂盒10

7437-54-9甲基辛弗林盐酸盐厂家  4-hydroxyephedrine    组织1酸二酯酶4(PDE4)活性酶连续循环光谱法定量检测试剂盒20

7432-28-2五味子醇甲品牌  Schisandrin  组织1酸二酯酶3(PDE3)活性荧光定量检测试剂盒10

74285-86-2雷酚内酯说明书  Triptophenolide    组织1酸二酯酶3(PDE3)活性酶连续循环光谱法定量检测试剂盒10
犬血栓调节蛋白(TM)试剂盒 Dog thrombomodulin,TM ELISA Kit  13241-28-6大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷说明书  Chrysophal 8-O-glucoside

英文名称MouseAILELISAKIT小鼠(AIL)规格：96T/48T  113443-70-2大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷品牌  Rhein-8-O-β-D-glucopyranoside

肠侵袭性大肠杆菌(EeroinvasiveE.coli)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20  514-47-6大戟二烯醇规格  Euphol

RatGasoiestinalcancerMarker-CA199ELISA试剂盒大鼠胃肠癌标志物CA199ELISA试剂盒规格：96T/48T  28978-02-1大蓟苷厂家  Pectolinarin

小鼠足盂蛋白(PCX)ELISA试剂盒 ，英文名： PCX ELISA Kit  539-15-1大麦芽碱说明书  Hordenine
RatIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISA试剂盒大鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒规格：96T/48T  1617-53-4穗花杉双黄酮品牌  Amentoflavone

小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)ELISA试剂盒 ，英文名： IDO1 ELISA Kit  572-31-6黄杞苷规格  Engeletin

小鼠全段甲状旁腺素(i-PTH)ELISA检测试剂盒MouseiactParathormone,i-PTHELISAKit 96T/48T  57420-46-98-O-乙酰山栀苷甲酯厂家  8-O-Acetyl shanzhiside methyl ester

人结核菌杆抗体IgG(TB-Ab IgG)试剂盒 Human tuberculosis aibody IgG,TB-Ab IgG ELISA Kit  64421-28-9山栀苷甲酯说明书  Shanzhiside methylester

Ratai-gonadoopin-releasinghormonereceptoraibody,GHR-AbELISAKit大鼠促性腺释放受体抗体(GHR-Ab)ELISA试剂盒规格：96T/48T  27741-01-1京尼平苷酸品牌  Geniposidic acid
HCT 116(人结肠癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0401NCI-H446(人小细胞肺癌细胞)5×106cells/瓶×2 非洲绿猴肾细胞系/IgRCD4-;VERO/IgRCD4-RAPIDWESTERNBLOTTINGKIT-RABBIT-WT快速Western Blotting试剂盒-兔(湿转)FROZENsigma

活/死细胞染色试剂盒CSK1，2-炳二醇二醋酯 1,2-Propylqnqglycol diccqtctq 63-84-7

GFRA1 Others Canine 狗 GFRA1 / GFR alpha-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 基钴安速(-20℃) Mqcobclcmin 134-22-4

人类原巨核细胞型白血病细胞;UT-7天青B，英文名或英文缩写：Azure B，级别：高，90%，规格：25克

HHCC细胞，人肝癌细胞 小鼠肺癌细胞,Lewis细胞 牦牛皮肤细胞;BMU-S1344-25-2D-脯酸D-Proline;(R)-Pyrrolidine-2-carboxylic acid;(R)-(+)-Proline;D-Pro
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
幽门螺旋杆菌(HP)试剂盒荧光-PCR法将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。