PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
|
产品名称
|
百日咳杆菌(BP)试剂盒荧光-PCR法
|
|
规格
|
50T
|
|
货号
|
XG-R64014
|
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
麦冬皂苷O-4规格 glycoside O-4 组织苹果酸脱氢酶(MDH)活性比色法定量检测试剂盒20
灵芝酸E品牌 Ganoderic acid E 组织牛病毒性腹泻病毒I型(BovineViralDiarrhoeaVirus-1;BVDV-1)定性试剂盒20
灵芝酸C6规格 Ganoderic acid
C6 组织牛病毒性腹泻病毒I型(BovineViralDiarrhoeaVirus-1;BVDV-1)定量PCR扩增检测试剂盒20
林泽兰内酯D说明书 Eupalinilide D 组织牛病毒性腹泻病毒II型(BovineViralDiarrhoeaVirus-2;BVDV-2)定性试剂盒20
林泽兰内酯C品牌 Eupalinilide
C 组织牛病毒性腹泻病毒II型(BovineViralDiarrhoeaVirus-2;BVDV-2)定量PCR扩增检测试剂盒20
犬乙型肝炎表面抗原(HBsAg)试剂盒 Canine hepatitis
B virus surface aigen,HBsAg ELISA Kit
34981-26-5苦参酮说明书 Kurarinone
英文名称MouseBALPELISAKit小鼠BALP规格：96T/48T 灵芝酸E品牌 Ganoderic acid E
冰冻切片组织组蛋白荧光显微镜检测试剂盒10/20 灵芝酸C6规格 Ganoderic acid C6
RatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISA试剂盒RatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISA试剂盒大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA试剂盒规格：96T/48T 100665-41-6灵芝烯酸B厂家 Ganoderenic acid B
小鼠组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)ELISA试剂盒 ，英文名： TIMP3 ELISA Kit 100665-43-8灵芝烯酸D说明书 Ganoderenic acid D
MouseAmylinELISA试剂盒小鼠胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒规格：96T/48T 33889-69-9水飞蓟汀厂家 Silicristin
小鼠原激活的蛋白激酶/MAP激酶(Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1)ELISA试剂盒 ，英文名： Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1 ELISA Kit
29782-68-1水飞蓟宁说明书 Silydianin
小鼠可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)ELISA检测试剂盒MouseSolubleClusterofdiffereiation40ligand,sCD40LELISAKit
96T/48T 72581-71-6异水飞蓟宾品牌 Isosilybin
人谷氨酸[NMDA]受体亚基ε-2(-2)抗体试剂盒 Human -2 Aibody
ELISA Kit 510-30-5刺囊酸规格 Echinocystic acid
RatGlycatedhemoglobinA1c,A1cELISAKit大鼠糖化血红蛋白A1c(A1c)ELISA试剂盒规格：96T/48T 17086-76-9杯苋甾酮厂家 Cyasterone
人主动脉平滑肌细胞 (HASMC)( 5×105
)Dopaminexy7nochloride3-羟基酪胺盐酸盐5克特，98.5%
CL-001195-D(人高转移肺癌细胞)5×106cells/瓶×2熊果苷;熊果酚苷;熊葡萄糖叶速;队本二酚葡糖苷;队本醌配葡萄糖;熊果叶苷 crbutin;xy7noinoneonq glucosq;xy7noinoneonq-β-D-glucopyrcnosidq;crbutosidq 497-76-7
百日咳杆菌(BP)试剂盒荧光-PCR法小鼠垂体瘤细胞(分泌促生长分泌);AtT-20 小鼠支气管上皮细胞完全培养基 100mL4-羟基shēng huà shì jì容量：0.25毫升
人脐静脉平滑肌细胞 HumanpHSTANDARD,7.0pH标准液7.0生物技术级
CSF1R Others Mouse 小鼠 CSF1R / M-CSFR / CD115 人细胞裂解液 (阳性对照) 3-AT
5g/10g/25g/100g原装 Sigma A8056
- 温馨提示：为规避购买风险，建议您在购买前务必确认供应商资质与产品质量。
- 免责申明：以上内容为注册会员自行发布，若信息的真实性、合法性存在争议，平台将会监督协助处理，欢迎举报