PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
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产品名称
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人疱疹病毒(HHV)试剂盒荧光-PCR法
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规格
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50T
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货号
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XG-R64050
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储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
人髓核细胞cDNAHNPC cDNAdTTP;2‘-脱氧胸苷-5’三1酸钠盐(dTTP)质量规格：>98%,BR2'-deoxythymidine-5'-triphosphate
(dTTP),3 salt, dihydrate
T47D细胞，人管癌细胞 猪肾细胞系,IBRS-2细胞 肺成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)2‘-脱氧尿苷质量规格：>99%,BR2'-Deoxyuridine
MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨细胞前体细胞) 5×106cells/瓶×2β-胸苷(dT);2'-脱氧胸苷质量规格：>99%,BRThymidine
HCMEC Pellet 人心脏微血管内皮细胞团块 > 1 mio.cells 纤维母细胞粘附检测试剂盒FibroDBD-F
[=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-氟-2,1,3-苯并恶二唑](>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)DBD-F
[=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole]
CL-0259BC-020(人癌细胞)5×106cells/瓶×2N-(1-芘基)马来(>97.0%(HPLC))质量规格：>97.0%(HPLC)N-(1-Pyrenyl)maleimide
人肺泡上皮细胞RNAHPAEpiC miRNA5 μg达那唑（标准品）Danazol质量规格：含量测定
FCER1A Others Mouse 小鼠 FcERI / FCER1A 人细胞裂解液 (阳性对照) 氨苯蝶啶（标准品）Triamterene质量规格：HPLC法含量测定
人脐静脉内皮细胞完全培养基 100mL拉呋替丁Lafutidine质量规格：>99%,BR
HSC-T6细胞，鼠肝星形细胞 SW620(结肠癌细胞) 人前列腺癌低转移细胞株;PC-3M-2B4拉呋替丁（标准品）Lafutidine质量规格：HPLC>98%,标准品
CSF1 Protein Mouse 重组小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白托可索仑/维生素E聚乙二醇琥珀酸酯Tocofersolan,VE-TPGS质量规格：VE含量≥260.00mg/g as dl-α-tocopherol
A-375[A375]细胞，恶性色素瘤细胞 白血病细胞,Jurk. Clone E6-1细胞 人皮肤鳞癌细胞;A-431 [A431](S)-萘普生异酰基-β-D-葡萄糖苷酸质量规格：美国进口(S)-Naproxen
Iso-acyl-β-D-glucuronide
艾氏腹水瘤瘤株;Ehrlich(R)-酰基萘普生-β-D-葡萄糖苷酸质量规格：美国进口(R)-Naproxen
Acyl-β-D-glucuronide
DKK1 Others Rhesus 恒河猴 DKK-1 / Dkk1 人细胞裂解液 (阳性对照) (1RS)-1-(6-甲氧-2-萘基)乙醇(萘普生杂质K)质量规格：美国进口(1RS)-1-(6-Methoxy-2-naphthyl)ethanol
(Naproxen Impurity K)
人视网膜色素上皮细胞HRPEpiC6'-甲氧基-2'-萘乙酮 (萘普生杂质 L)质量规格：美国进口6'-Methoxy-2'-acetonaphthone
(Naproxen Impurity L)
EPO Others Rat 大鼠 Erythropoietin / EPO 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (S)-普拉克索二盐酸化物质量规格：美国进口(S)-Pramipexole
Di
PRSS8 Others Mouse 小鼠 Prostasin /
PRSS8 (aa 30-289) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 血清兔抗FITC1公斤RT
人疱疹病毒(HHV)试剂盒荧光-PCR法CL-0009769-P(人肾细胞腺癌细胞)5×106cells/瓶×23--1,2,4-三氮坐 1H-1,2,4-Triczolq-3-thiol
B16-F10, 小鼠色素瘤高转移细胞 皮肤色素瘤细胞,SK-HEL-1细胞 HCCLM3(肝癌细胞)PIPESwo7iumSALTPIPES,
Na白色精细结晶粉末RTsigma
小鼠垂体瘤细胞(分泌促生长分泌);AtT-20L-HISTIDINEMONOxy7noCHLORIDEMONOHYDRATEL-组酸盐酸盐美国食品化学品法典级白色粉末RTsigma
FCGR1 Others Human 人 CD64 / FCGR1A 人细胞裂解液 (阳性对照) 异亚丙基MESITYL OXIDE