人星状病毒(HastV)试剂盒荧光-PCR法

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
小鼠成骨细胞完全培养基 100mLDL-α-羟基戊二酸二钠质量规格：98%,GC,进分sigma 94577DL-α-Hydroxyglutaric acid di salt

P388D1小鼠样瘤细胞 P388D1 mouse lymphoid tumor cells RPMI-1640(GIBCO)+90%马血清+10%FBS地美溴胺质量规格：>99%,BRDemecarium Bromide

IL12B Protein Human 重组人 IL12B / P40 蛋白 (Fc 标签)喹哪啶红质量规格：ARQuinaldine Red

人脑微血管内皮细胞 (HBMEC) ( 5×105 ) 大鼠主动脉平滑肌细胞 细胞名称酚酞(98%)质量规格：>98%Phenolphthalein

CM-R057大鼠肾系膜细胞完全培养基100mL四溴酚蓝质量规格：INDTetrabromophenol blue
人骨肉瘤细胞;HOS苯扎氯铵（标准品）Alkyldimethylbenzylammonium chloride质量规格：供HPLC法检查用和容量法含量测定用

人成纤维细胞(HMF)(5×105)苯扎氯铵（标准品）Alkyldimethylbenzylammonium chloride质量规格：含量测定用

CM-H112人脂肪细胞完全培养基100mL甲硫酸新斯的明(标准品)Neostigmine methyl sulfate质量规格：HPLC>99%,标准品

小鼠浆细胞瘤;MPC-11 小鼠直肠平滑肌细胞完全培养基 100mL甘草酸二钾（标准品）Dipotassium glycyrrhizinate质量规格：含量测定

rEPC，大鼠内皮祖细胞-骨髓 Rattus尼美舒利（标准品）Nimesulide质量规格：含量测定
293T细胞，人胚肾T细胞 人卵巢癌细胞,HO-8910细胞 人心肌细胞裂解物HCML戈米辛D(标准品)质量规格：＞98.0% (LC&T)，标准品Gomisin D

SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-11-甲基质量规格：>98%1-Methyl Xanthine

IFNA5 Others Human 人 IFNαG / IFNaG / Ierferon alpha-G 人细胞裂解液 (阳性对照) 6-羧基-X-罗丹明质量规格：>95%6-Carboxy-X- rhodamine; 6-ROX

豚鼠皮肤细胞;GP-S2西仑吉肽质量规格：>97%,integrin抑制剂Cilengitide,EMD121974,NSC 707544

IFNA14 Others Mouse 小鼠 IFNA14 / Ierferon alpha-14 人细胞裂解液 (阳性对照) 柴胡皂苷B2（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Saikosaponin B2
94-62-2胡椒碱规格  Piperine   组织基质金属蛋白酶(MMP-12)活性荧光定量检测试剂盒20

94596-28-8洋川芎内酯I厂家  Senkyunolide I  组织基质金属蛋白酶(MMP-12)活性比色法定量检测试剂盒20

94596-27-7洋川芎内酯H规格  Senkyunolide H   组织基质金属蛋白酶(MMP-10)活性荧光定量检测试剂盒20

945619-74-9麦冬皂苷D说明书  Ophiopogonin D  组织基质金属蛋白酶(MMP-10)活性比色法定量检测试剂盒20

94356-26-0曲札茋苷规格  3,5,3’,4’-trihydroxy-stilbene -3’-b-D-glucoside   组织基质金属蛋白酶(MMP-1)活性荧光定量检测试剂盒20
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
人星状病毒(HastV)试剂盒荧光-PCR法在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。