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产品资料

转基因植物NPTII基因试剂盒荧光-PCR法

转基因植物NPTII基因试剂盒荧光-PCR法
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  • 产品名称:转基因植物NPTII基因试剂盒荧光-PCR法
  • 产品型号:XG-R64112
  • 产品展商:西格
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简单介绍
转基因植物NPTII基因试剂盒荧光-PCR法保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
产品描述

产品特点: 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断
灵敏度高:可检测个位拷贝数的基因
特异性高:有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高:复孔间差异小,实验结果重复性强
扩增性能优:扩增效率高,荧光信号强

产品名称

转基因植物NPTII基因试剂盒荧光-PCR

规格

50T

货号

XG-R64112

储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内**的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤高压。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
人胚胎气管组织来源细胞;CCC-HBE-2 人肺泡上皮细胞完全培养基 100mL烟酰胺(标准品)质量规格:HPLC99.5%,标准品Nicotinamide

小鼠质神经元MN-sn雪胆素甲(标准品)质量规格:HPLC98%,标准品cucurbitacins

CST3 Others Rat 大鼠 CST3 / Cystatin-C / Cystatin-3 人细胞裂解液 (阳性对照) 5-羟色胺酸(标准品)质量规格:HPLC98%,标准品5-Hydroxytryptophan5-HTP

HEL1 人胚肺成纤维样细胞()5-羟色胺酸(5-HTP)质量规格:>98%,混旋5-Hydroxytryptophan

CM-R075大鼠主动脉内皮细胞完全培养基100mL富马酸比索洛尔(标准品)质量规格:HPLC法含量测定Bisoprolol fumarate
人肾上腺皮质腺癌细胞;NCI-H295R泰诺福韦;替诺福韦(标准品)Tenofovir质量规格:HPLC99%,标准品

HO-8910PM细胞,高转移卵巢癌细胞 人胃粘膜细胞,GES-1细胞 狗肺成纤维样细胞;DogL1阿那曲唑Anastrozole质量规格:度> 99%,BR,可用于细胞培养

tTA基因修饰的小鼠畸胎瘤细胞(B);P19-CAG-tTA-1F3阿那曲唑(标准品)Anastrozole质量规格:HPLC>98%,标准品

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Indonesia/5/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 硫酸安普霉素,硫酸阿布拉霉素Apramycin sulfate质量规格:>500U/mg,BR

人肺动脉成纤维细胞HPAF硫酸安普霉素(标准品)Apramycin sulfate质量规格:含量测定
AARS Others Mouse
小鼠 AARS / alanyl-NA syhetase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 硅酸钠1

仓鼠卵巢细胞;Lec1姆沙伯 101 Chromosorb 101

BEL-7405细胞,肝癌细胞 膀胱癌细胞,BI U-87细胞 615小鼠树突状细胞肉瘤瘤株;DCS聚乙二醇 3350 Poly(ethylene glycol) 3,350 (PEG 3350) 25322-68-3 100G 通用试剂

小鼠肺腺癌低转移细胞(绿色荧光蛋白标记);LA1-GFPLM-137琼脂500

CD274 Others Mouse 小鼠 B7-H1 / CD274 / PD-L1 人细胞裂解液 (阳性对照) (D-基葡萄糖)
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检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
转基因植物NPTII基因试剂盒荧光-PCR在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

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