PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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产品名称
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转基因植物Bar基因试剂盒荧光-PCR法
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规格
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50T
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货号
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XG-R64113
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检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
人心脏成纤维细胞( HCF) ( 5×105 ) GC-1, 鼠精原细胞 Mouse二苯并-21-冠7-(>96.0%(GC))质量规格：>96.0%(GC)Dibenzo-21-crown
7-Ether
小鼠成纤维细胞;φ24'-甲酰苯并-15-冠-5-(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)4'-Formylbenzo-15-crown
5-Ether
TNFRSF17 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 TNFRSF17 / BCMA 人细胞裂解液 (阳性对照) 4'-甲酰苯并-18-冠-6-(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)4'-Formylbenzo-18-crown
6-Ether
SHG-44人胶质瘤细胞 Human glioma cell line
SHG-44 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS4,7,13,21,24-六氧杂-1,10-二氮杂双环[8,8,8]-二十六烷(>98.0%(GC)(T))质量规格：>98.0%(GC)(T)4,7,13,16,21,24-Hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane
IMR-32细胞，人神经母细胞瘤细胞 黄杆菌属 人脑血管平滑肌细胞RNAHBCSMC miRNA5 μg二-N-去乙基胺酮质量规格：美国进口Di-N-desethyl
Amiodarone
人胎盘绒毛膜细胞完全培养基 100mLN-氧基奥氮平Olanzapine
N-Oxide质量规格：美国进口
MA-891细胞，小鼠癌高转移细胞 L929(成纤维细胞) 人葡萄膜色素细胞;UM氨曲南Aztreonam质量规格：> 95%,BR
CCL7 Protein Human 重组人 MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 标签)氨曲南（标准品）Aztreonam质量规格：HPLC>95%,标准品
RH-35(大鼠肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H7N8
(A/mallard/Netherlands/33/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 巴卡丁 IIIBaccatin III质量规格：度> 98%,BR，可用于细胞培养
人肺转化细胞;AE1201巴卡丁 III（标准品）Baccatin III质量规格：HPLC>98%,标准品
AGRP Others Mouse 小鼠 AGRP / AgRP 人细胞裂解液 (阳性对照) X-SA琼脂培养基shēng huà shì jì容量：RT1把/包
MEG-01 人成巨核细胞白血病细胞偶氮录膦mN;2-(4-录-2-膦醋基本偶氮)-7-(3-肖基本偶氮)-1,8-二羌基-3,6-二磺醋 Chlorophosphonczo MN 77320-04-0
MSTO-211H人肺癌细胞株 Human lung cancer cell line
MSTO-211H RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS (50%) Glutaraldehyde solution (Grade I, 50%
... 10ML 通用试剂
MIF Protein Human 重组人 MIF / GLIF 蛋白 (His 标签)L-天门冬酸钾shēng huà shì jì容量：RT25克
人胚肺成纤维细胞;WI-38 [WI38] 人支气管成纤维细胞完全培养基 100mL(二硫代苏糖醇)
260413-62-5女贞苷说明书 ligustroflavone 英文名称RatTATELISAKit大鼠凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)规格：96T/48T
260413-62-5女贞苷说明书 Ligustroflavone 英文名称Rattarate-resistaacidphosphataseorm5bELISAKit大鼠抗酸酸性1酸酶5b(ACP5b)规格：96T/48T
2586-96-1莲心碱规格 Liensinine 英文名称Rattarate-resistaacidphosphataseorm5bELISAKit大鼠抗酸酸性1酸酶5b(ACP5b)规格：96T/48T
256925-92-5升麻酮醇-3-O-α-L-拉伯糖苷说明书 Cimigenol-3-O-α-L-arabinoside 英文名称RatT4ELISAKit大鼠甲状腺素(T4)规格：96T/48T
25459-91-0去亚甲基小檗碱说明书 Demethyleneberberine 英文名称RatT4ELISAKit大鼠甲状腺素(T4)规格：96T/48T
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
转基因植物Bar基因试剂盒荧光-PCR法６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。