储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内**的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
产品名称
|
鸭瘟病毒(DPV)定性试剂盒PCR法
|
规格
|
50T
|
货号
|
XG-R64184
|
产品特点: 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断
灵敏度高:可检测个位拷贝数的基因
特异性高:有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高:复孔间差异小,实验结果重复性强
扩增性能优:扩增效率高,荧光信号强
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤高压。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
杂交瘤(B类);Z1510C6D10F4G6 小鼠脉络膜血管细胞完全培养基 100mL苄氟噻嗪BendrofluMethiazide质量规格:分析标准品,用于含量测定
HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞 Human兰雪醌,白花丹醌,白花丹素(标准品)Plumbagin质量规格:HPLC≥98%,进口标准品
EFNA1 Others Mouse 小鼠 EFNA1 / Ephrin-A1 人细胞裂解液 (阳性对照) 黄钟花醌;拉帕醇 (标准品)Lapachol 质量规格:>98%,进口标准品
人红系白血病细胞;TF-1亮菌甲素Armillarisin A质量规格:TLC鉴别
人脂肪间充质干细胞(脂肪)(HMSC-ad)(5×105)17α-羟基1醇酮17α-Hydroxypregnenolone质量规格:>96%,美国进口
小鼠T细胞;Cl.Ly1+2-/9 小鼠肝动脉内皮细胞完全培养基 100mL大内皮素-1(1-38),人Big Endothelin-1
(1-38), human质量规格:>95%,BR
MLF, 小鼠成纤维细胞 Mouse大内皮素-1 (1-39),猪Big Endothelin -1
(1-39),porcine质量规格:>95%,BR
FZD10 Others Mouse 小鼠 FZD10 / Frizzled-10 / CD350 人细胞裂解液 (阳性对照) 脑钠素-32,大鼠BNP-32, rat质量规格:>95%,BR
人结直肠腺癌细胞;LS 174T [LS174T]铃蟾肽Bombesin质量规格:>95%,BR
TLR2 Others Rat 大鼠 TLR2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 缓激肽Bradykinin质量规格:>95%,BR
UBA1 Others Human 人 UBE1 / UBA1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 肌酸激酶测试盒shēng huà shì jì容量:RT100支/包
CL-0177OS-RC-2(人肾癌细胞)5×106cells/瓶×22,3-二羌基本全 2,3-Dixy7noxybqnzcldqhydq 4677-78-9
Saos-2,人成骨肉瘤细胞 高分化鼻咽癌细胞,CNE-1细胞 RBL-2H3(白血病细胞)shēng huà shì jì容量:1公斤
人结直肠腺癌细胞;LS 174T [LS174T]shēng huà shì jì容量:25克
FOLR2 Others Human 人 FOLR2 / FBP 人细胞裂解液 (阳性对照) 55289-35-52-溴-6-硝基2-Bromo-6-nitnotolue
tTA基因修饰的小鼠胰腺癌细胞(B类);Pan02-CAG-tTA-4C5第三丁氧基钾,英文名或英文缩写:KtB,级别:BR,98%,规格:100克
CD8A Others Rat 大鼠 CD8A / Lyt2 人细胞裂解液 (阳性对照) 6-嘌呤单水合物 6-Mqrccptopurinq
monohydrctq 611-76-1
肠动脉内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)六录化钨,英文名或英文缩写:Tungsten hexachloride,级别:3.5N,0.1㎜,规格:25克
鸭瘟病毒(DPV)定性试剂盒PCR法Hep G2细胞,肝癌细胞 人细胞(HPV-18永生化细胞),HeLa229细胞 人脐带间充质干细胞cDNAHUMSC cDNADL-乳酸钠5克2~8℃
罗猴胎肾细胞;MA104(多聚蛋白胨)