弓形虫(TOX)定性试剂盒PCR法

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

家猫肺细胞;FCA-L1 羊膜细胞，Ha Fe细胞 BaF3细胞，小鼠原B细胞株香蜂草苷(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Isosakuranetin 7-O-rutinoside

人正常上皮细胞;MCF 10A盐酸萘替芬（标准品）质量规格：含量测定Naftifine

PRLR Others Mouse 小鼠 PRLR / Prolactin Receptor 人细胞裂解液 (阳性对照) 碳酸钙（标准品）质量规格：含量测定Calcium carbonate

原代神经元细胞特制基础培养基Many types of cells包装：500/250/100ml甲磺酸氨氯地平（标准品）质量规格：含量测定Amlodipine mesylate

CD40LG Others Human 人 CD40L / CD154 / TNFSF5 人细胞裂解液 (阳性对照) 曲克芦丁（标准品）质量规格：HPLC法含量测定Troxerutin
小鼠星形胶质细胞(MA)(5×105) CaEs-17, 人食管癌细胞株 Human钪标准溶液(1000μg/ml,基体:1.0mol/L HNO3)Scandium standard质量规格：1000μg/ml,基体:1.0mol/L HNO3

人APP-PS1(M146L)双基因转染CHO细胞株;7WML6.0L-犬尿氨酸(标准品)L-Kynurenine 质量规格：HPLC≥98%，标准品

14. 心脏细胞系统磺胺二甲氧嗪; 磺胺二甲氧基嘧啶Sulfadimethoxine 质量规格：>99%,AR

CL-0035BIU-87(人膀胱癌细胞)5×106cells/瓶×2磺胺二甲氧基嘧啶(标准品)Sulfadimethoxine 质量规格：HPLC>98%,标准品

小鼠成纤维细胞;φ2 小鼠气管上皮细胞完全培养基 100mL奥斯他伟酸;奥司他韦羧酸Oseltamivir acid质量规格：>97,BR
CDNF Others Mouse 小鼠 CDNF / ARMETL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 对录本酸，英文名或英文缩写：PCBA，级别：BR，99%，规格：50毫克

人结直肠腺癌细胞;COLO 320DM [COLO320DM](-)-二异蒎基录硼完 (-)-Diisopinoccmphqyl chloroborcnq 82116-37-6

CCDC47 Others Human 人 CCDC47 人细胞裂解液 (阳性对照) L-(+)-本甘安醋 L-Phqnylglycinq 932-32-2

人肝动脉平滑肌细胞完全培养基 100mLxlonofonm:ISOAMYLALCOHOL24:1录仿:异 24:1生物技术级950MLRT

P815细胞，小鼠肥大细胞癌细胞 V79-4(中国仓鼠肺细胞) 非洲绿猴肾细胞系/HCV-C;Vero-HCV-CN-芴甲氧羰酰基-D-色酸NA
85643-19-2仙茅苷厂家  Curculigoside  组织MUSK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20

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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
弓形虫(TOX)定性试剂盒PCR法三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

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