PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
产品特点: 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断
灵敏度高:可检测个位拷贝数的基因
特异性高:有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高:复孔间差异小,实验结果重复性强
扩增性能优:扩增效率高,荧光信号强
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内**的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
产品名称
|
鹿源性成分(Deer)定性试剂盒PCR法
|
规格
|
50T
|
货号
|
XG-R64260
|
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
60976-49-0老鹳草素品牌 Geraniin 猪转铁蛋白(TF)试剂盒 Pig ansferrin,TF
ELISA Kit
60-82-2根皮素厂家 Phloretin 猪转录因子AP-1 试剂盒 Pig anscription
Factor/Activator Protein 1,AP-1 ELISA KIT
60-82-2根皮素厂家 Phloretin 猪转化生长因子β1(TGF-β1)试剂盒 Porcine TGF-β1 ELISA Kit
60-81-1根皮苷规格 Phlorizin 猪转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA检测试剂盒Porcineansforminggrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAKit 96T/48T
6080-33-7盐酸青藤碱品牌 Sinomenine 猪主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ/SLAⅢ)ELISA检测试剂盒swinemajorhistocompatibilitycomplexⅢ,MHCⅢ/SLAⅢELISAKit 96T/48T
小鼠转化受体电位阳离子通道亚家族M成员4(PM4)ELISA试剂盒 ,英文名: PM4 ELISA
Kit 1358-76-5钩吻素子说明书 Koumine
犬血栓前体蛋白(TpP)ELISA检测试剂盒Caninethrombusprecursorprotein,TpPELISAKit
96T/48T 77-92-9枸橼酸品牌 Citric Acid
犬纤溶酶原激活物抑制剂1(SERPINE1)试剂盒 Dog plasminogen activator
inhibitor 1,SERPINE1 ELISA kit 546-97-4古伦宾规格 Columbin
英文名称humanHistamineELISAKIT人组胺(Histamine)规格:96T/48T 882664-74-6瓜子金皂苷己厂家 Polygalasaponin F
超氧化物歧化酶(SOD)标准曲线测定试剂盒5 光翠雀碱说明书 denudatine
持久型ECL印迹化学发光溶液A液:100毫升B液:500微升1000cm2 26342-66-5闹羊花III规格 Rhodojaponin-III
RatHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISA试剂盒大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA试剂盒规格:96T/48T 69884-00-0拟人参皂苷F11厂家 Pseudoginsenoside F11
小鼠中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒 ,英文名: NGAL ELISA Kit 98474-78-3拟人参皂苷RT5说明书 Pseudoginsenoside RT5
小鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA检测试剂盒MouseSuperOxidaseDimase,SODELISAKit
96T/48T 1180-71-8柠檬苦素品牌 Limonin
人军团菌抗体IgM(LP Ab-IgM)试剂盒 Human Legionella aibody
IgM,LP Ab-IgM ELISA Kit 20362-31-6牛蒡子苷规格 Arctiin
猪细胞间粘附分子1elisa试剂盒 猪细胞间粘附分子1试剂盒 规格型号:96T/48T Shikonin 中文名:紫草素 分子式:C16H16O5 度:99.0%
猪戊型肝炎病毒IgG(HEV-IgG)ELISA试剂盒 48T/96T 试剂盒 组装/原装
Shikimic acid 138-59-0 中文名:莽草酸 分子式:C7H10O5
猪戊型肝炎病毒(HEV)核酸检测试剂盒(-PCR法) 48T
Shiraiachrome A 中文名: 分子式:C30H26O10 度:%
病毒抗体elisa试剂盒 病毒抗体试剂盒 规格型号:96T/48T Shikonin 中文名:紫草素 分子式:C16H16O5
病毒(CSFV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T Stigmasta-4,25-dien-3-one 848669-08-9 中文名: 分子式:C29H46O
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
鹿源性成分(Deer)定性试剂盒PCR法三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤高压。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。