NPTII基因试剂盒PCR-荧光探针法

产品特点: 本产品只适用于科研，不��用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
三七皂苷Ft1说明书  Notoginsenoside Ft1   组织色素含量比色法定量检测试剂盒20

三七皂苷Ft1厂家  Notoginsenoside Ft1  组织三1酸肌醇(IP3)含量化学荧光定量检测试剂盒20

三七皂苷Fc规格  Notoginsenoside Fc  组织三1酸肌醇(IP3)含量化学比色法定量检测试剂盒20

肉桂酸说明书  cinnamic acid    组织三1酸肌醇(IP3)含量FR定量检测试剂盒20

人参皂苷Rk1规格  Ginsenoside Rk1   组织乳酸脱氢酶(LDH)总活性酶动力比色法定量检测试剂盒20
鸭白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA检测试剂盒DuckIerleukin-8,IL-8ELISAKit 96T/48T  174972-80-6巴利森苷C厂家  Parishin C 

犬游离状腺原氨酸(Free-T3)试剂盒 Canine Free i-iodothyronine Indes,Free-T3 ELISA Kit  62499-28-9巴利森苷B说明书  Parishin B 

英文名称MouseBLC-1/CXCL13ELISAKit小鼠B-细胞趋化因子1(BLC-1/CXCL13)规格：96T/48T  62499-28-9巴利森苷A品牌  Coniferin 

冰冻切片组织线粒体膜通道孔(MPTP)荧光检测试剂盒50  76135-82-5牡荆素葡萄糖苷规格  Glucosyl-vitexin 

RatFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISA试剂盒大鼠凋亡相关因子配体(FASL)ELISA试剂盒规格：96T/48T  51771-49-4氯化缬草素厂家  valechlorine
Mouse15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISA试剂盒小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA试剂盒规格：96T/48T  34420-19-4千金子二萜醇厂家  Lathyrol

小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(ELA2)ELISA试剂盒 ，英文名： ELA2 ELISA Kit  88206-46-6羌活醇说明书  Notopterol 

犬球蛋白E(IgE)ELISA检测试剂盒CanineImmunoglobulinE,IgEELISAKit 96T/48T  78281-02-4羟基红花黄色素A品牌  Hydroxysafflor yellow A

犬软骨寡聚基质蛋白(COMP)试剂盒 Dog cailage oligomeric maix protein,COMP ELISA kit  34540-22-2羟基积雪草苷规格  Madecassoside 

英文名称HumanFree-T4ELISAKit人游离甲状腺素(Free-T4)规格：96T/48T  18449-41-7羟基积雪草酸厂家  Madecassic acid
猪皮质醇(Coisol)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Sprengerinin A  中文名：  分子式：C38H60O12 

猪皮质/上腺(CO)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Spongouridine  中文名：阿糖尿苷  分子式：C9H12N2O6  度：98.0%

猪皮质/上腺(CO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Sprengerinin A  中文名：  分子式：C38H60O12  度：%

猪疱疹病毒(PHV)核酸检测试剂盒   48T  Sprengerinin C  中文名：  分子式：C44H70O16  度：98.0%

猪内源性逆转录病毒前病毒(PERV-pre)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T  Stanolone  中文名：雄诺龙  分子式：C19H30O2
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
NPTII基因试剂盒PCR-荧光探针法在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

产品留言

标题

联系人

联系电话

内容

验证码

点击换一张

注：1.可以使用快捷键Alt+S或Ctrl+Enter发送信息!
2.如有必要,请您留下您的详细联系方式!