PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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产品名称
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PAT基因试剂盒PCR-荧光探针法
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规格
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48T 0.2PCR管
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货号
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XG-R64285
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检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
林泽兰内酯B规格 Eupalinilide B 组织牛病毒性腹泻病毒(BovineViralDiarrhoeaVirus;BVDV)定性试剂盒20
苦玄参苷ⅠB说明书 Piefeltarraenin ⅠB 组织牛病毒性腹泻病毒(BovineViralDiarrhoeaVirus;BVDV)定量PCR扩增检测试剂盒20
金色酰胺醇酯厂家 Aurantiamide
acetate 组织凝血酶/活化凝血因子II(THROMBIN/FACTORIIa)活性荧光定量检测试剂盒20
绞股蓝皂苷XLIX规格 Gypenoside XLIX 组织凝血酶/活化凝血因子II(THROMBIN/FACTORIIa)活性比色法定量检测试剂盒20
甲基麦冬黄酮B说明书 Methylophiopogonone
B 组织柠檬酸合成酶活性比色法定量检测试剂盒20
鸭病毒性肠炎病毒(DEV)ELISA检测试剂盒Duckviruseeritis,DEVELISAKit
96T/48T 98665-22-6灵芝酸G品牌 Ganoderic acid G
犬乙酰胆碱受体抗体(AChRab)试剂盒 Canine acetylcholine
receptor aibody,AChRab ELISA Kit
98296-48-1灵芝酸C2规格 Ganoderic acid
C2
英文名称MouseAβ1-42proteinELISAKit小鼠Aβ1-42蛋白规格：96T/48T 108340-60-9灵芝酸D厂家 Ganoderic acid D
冰冻组织固着液50毫升 74285-86-2雷酚内酯说明书 Triptophenolide
Ratferritin,FEELISA试剂盒大鼠铁蛋白(FE)ELISA试剂盒规格：96T/48T 74285-86-2雷酚内酯品牌 Triptophenolide
MouseAngiotensinconveingenzyme,ACEELISA试剂盒小鼠血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒规格：96T/48T 36948-76-2千层纸素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷厂家 Oroxyloside
小鼠幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA试剂盒 ，英文名： Hp-IgG ELISA Kit 114482-86-9木蝴蝶苷B说明书 Oroxin B
小鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA检测试剂盒MousePulmonarysurfatca-associatedproteinA,SP-AELISAKit
96T/48T 木蝴蝶苷A品牌 Oroxin A
人结核菌素(Tuberculin)试剂盒 Human Tuberculin ELISA
Kit 绞股蓝皂苷XLIX规格 Gypenoside XLIX
Ratai-endothelialcellaibody,AECAELISAKit大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)ELISA试剂盒规格：96T/48T 去芹菜糖桔梗皂苷D厂家 Deapio platycodin D
猪内源性逆转录病毒前病毒(PERV-pre)核酸检测试剂盒 48T
Stanolone 521-18-6 中文名：雄诺龙 分子式：C19H30O2 度：98.0% 关键词：
猪内源性逆转录病毒(PERV)核酸检测试剂盒(-PCR法) 48T
Stanolone 中文名：雄诺龙 分子式：C19H30O2 度：98.0%
猪内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Stanozolol 中文名：康力龙 分子式：C21H32N2O 度：98.0%
猪内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISAKit
ELISA. 96T/48T Testosterone decanoate 5721-91-5 中文名：癸酸 分子式：C29H46O3
猪内皮型合成酶(eNOS)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Stanozolol 中文名：康力龙 分子式：C21H32N2O
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PAT基因试剂盒PCR-荧光探针法三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
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