pFMV35S基因试剂盒PCR-荧光探针法

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

13241-28-6大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷说明书  Chrysophal 8-O-glucoside   英文名称RatFree-TestoteroneELISAKit大鼠游离睾同(Free-Testoterone)规格：96T/48T

13190-97-1茄尼醇厂家  Solanesol   英文名称RatFree-T4ELISAKit大鼠游离甲状腺素(Free-T4)规格：96T/48T

13161-75-6北美芹素品牌  pteryxin   英文名称RatFree-T4ELISAKit大鼠游离甲状腺素(Free-T4)规格：96T/48T

13133-07-8耐斯糖厂家  Nystose  英文名称RatFree-T3ELISAKit大鼠游离状腺原氨酸(Free-T3)规格：96T/48T

131189-57-6山茱萸新苷规格  Cornuside  英文名称RatFree-T3ELISAKit大鼠游离状腺原氨酸(Free-T3)规格：96T/48T
英文名称HumanangiotensinogenELISAKit人血管紧张素原(aGT)规格：96T/48T  69659-80-9丹参酮IIA-磺酸钠品牌  Tanshinone IIA-sulfonic 

化线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒20/200  53452-16-7王不留行黄酮苷规格  Vaccarin

RatIerferonβ,IFN-β/IFNBELISA试剂盒大鼠β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA试剂盒规格：96T/48T  94987-08-3绞股蓝皂苷厂家  Stevenleaf

小鼠原钙黏素15(PCDH15)ELISA试剂盒 ，英文名： PCDH15 ELISA Kit  6024-85-7延胡索乙素说明书  Tetrahydropalmatine

猴载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA检测试剂盒MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 96T/48T  6080-33-7盐酸青藤碱品牌  Sinomenine
英文名称HumaumornecrosisfactorsolublereceptorⅡELISAKIT人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsRⅡ)规格：96T/48T  104012-37-5款冬酮品牌  Tussilagone

超氧化物歧化酶(SOD)活性酶动力比色法定量检测试剂盒(含标准样)50  404-86-4辣椒碱规格  Capsaicin

RatgranzymesA,Gzms-AELISA试剂盒大鼠颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒规格：96T/48T  58543-16-1莱苞迪苷A厂家  Rebaudioside A

小鼠周期素依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)ELISA试剂盒 ，英文名： CDKN2A ELISA Kit  79498-31-0蓝萼甲素说明书  glaucocalyxin A

犬双氢(DHT)ELISA检测试剂盒CanineDihydrotestosterone,DHTELISAKit 96T/48T  11088-09-8CAS号：11088-09-8品牌  wilforine
猪链球菌Ⅱ型(SS-Ⅱ)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T  Stigmasta-4,22-diene-3β,6β-diol  中文名：  分子式：C29H48O2  度：97.5%

猪链球菌Ⅱ型(SS-Ⅱ)核酸检测试剂盒   48T  Stigmasta-4,22-diene-3β,6β-diol  中文名：  分子式：C29H48O2 

猪蓝耳病毒elisa试剂盒   猪蓝耳病毒试剂盒   规格型号：96T/48T   猪蓝耳病毒试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：猪蓝耳病毒试剂盒、猪蓝耳病毒eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。     Stavudine  3056-17-5  中文名：司他夫定  分子式：C10H12N2O4 

猪蓝耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸检测试剂盒(-PCR法)   48T  Stigmasta-4,25-dien-3-one  中文名：  分子式：C29H46O  度：%

猪蓝耳病（PRRS）ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Stigmasta-5,8-dien-3-ol  中文名：  分子式：C29H48O  度：%
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
pFMV35S基因试剂盒PCR-荧光探针法３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。